Картинки идеи для лд по клеточкам: Рисунки по клеточкам для Личного дневника: маленькие и легкие

Содержание

Идеи для ЛД рисунки для срисовки, легкие и красивые по клеточкам

Содержание

Рисунки в личном дневнике нужны для красивого оформления записей. Картинки можно подбирать по смыслу или выделить несколько страниц и рисовать там всё что захочется в любое время. Красиво оформить блокнот изнутри помогут описания популярных идей разных и рисунков и пошаговые мастер-классы.

Легкие картинки для ЛД

В таблице описаны примеры того, какими могут быть изображения и на каких страницах их можно рисовать.

Что изображено на рисунке	Для каких страниц ЛД подходит
Цветы и растительные узоры	Подходят для украшения полей на страницах тетради.
Люди и животные	Помогут лучше передать эмоции и чувства, описанные в дневнике.
Символы и значки	Можно вставлять между строк и заменять ими некоторые слова.
Абстракции	Подходят для оформления тех страниц, где заканчивается 1 раздел дневника и начинается другой.

Чтобы разрисовывать свой дневник, необязательно владеть художественными навыками и особыми знаниями. Картинки могут быть простыми, без мелких деталей. Рисовать можно используя любые материалы, карандаши, цветные ручки, фломастеры и краски. Углы страниц можно украсить сердечками и витиеватыми узорами.

Что потребуется для рисования:

простой карандаш;
ластик:
карандаш розового цвета;
коричневый и красный фломастер.

Идеи для ЛД — рисунки сердечек на уголке страницы

Как рисовать узор:

Нарисовать несколько плавных линий в хаотичном порядке. Один из концов каждой линии должен заканчиваться спиралью, словно он закручивается в локон.
Добавить к каждой линии новые, но более короткие. Также изобразить вьющиеся кончики.
Нарисовать 3-4 закручивающиеся ветви. Пусть спирали на их концах будут направлены в разные стороны.
Между этими линиями нарисовать 3 сердца разной величины.
Розовым карандашом закрасить сердца.
Ластиком стереть лишние линии, если есть. Затем взять коричневый фломастер и обвести витиеватые узоры.
Красным фломастером обвести сердца по контуру.

Если страницы личного дневника тонкие, то красящее вещество фломастера пропитается сквозь них. Чтобы не испачкать другие листы, под страницу, на которую будет нанесен рисунок, нужно подложить картон.

Красивые картинки

Идеи для ЛД (рисунки, которые не получается срисовать, можно распечатать на принтере и вклеить в дневник) ярких и красочных картинок считаются наиболее красивыми.

Для рисования в таком стиле лучше использовать краски или художественную пастель, нежели фломастеры. Иначе обратная сторона листа с рисунком, всегда будет в цветных пятнах.

Тонкие, листы могут деформироваться от красок. Лучше рисовать картинки на отдельных листах бумаги, а после высыхания красок или фломастеров, прогладить изображение с обратной стороны утюгом. Затем вырезать и приклеить рисунок на страницу дневника.

Пример яркого рисунка для личного дневника в виде кошки, сидящей на подоконнике и наблюдающей из окна за космосом.

Что потребуется для рисования:

простой карандаш;
ластик;
линейка;
белый корректор;
художественные кисти или ватные палочки;
черный фломастер.

Ещё потребуется акварель или художественная пастель 4 цветов: синяя, голубая, розовая, фиолетовая. Сделать плавные переходы из 1 цвета в другой с помощью других материалов не получится.

Как рисовать:

Следует определиться с высотой и шириной окна. Пусть, подоконник будет 7 см в длину, а само окно 10 см в высоту. Простым карандашом нужно начертить прямоугольник с такими параметрами.
Закруглить верх окна, чтобы оно приняло форму арки. От каждого верхнего угла отступить по 1,5 см вниз по бокам и ближе к центру, по верхней линии. Соединить эти точки дугами.
Нарисовать оконную раму. От контура окна отступить 5 мм и провести параллельные линии по всему периметру рисунка.
Найти центр подоконника и провести линию до верхушки окна. Затем проложить еще 1 параллельную линию, чтобы толщина полоски была ровно 5 мм.
От верха начерченной полосы отложить вниз 3 см и провести горизонтальную линию через всё окно. Снизу проложить параллель на расстоянии 5 мм.

Нарисовать еще 2 части оконной рамы толщиной 5 мм, разделяя этими полосами верхние части окна на 2.
Нарисовать кошку, сидящую на окне. Она развернута спиной, поэтому можно изобразить только силуэт: острые уши, голову, спину и свисающий хвост.
Если фон за окном будет раскрашен художественной пастелью, то можно накрошить мелки разных цветов, а затем аккуратно растереть крошку ватными палочками. Цвет не должен попасть на белую оконную раму и силуэт кошки.

Перед рисованием акварелью, нужно слегка смочить область раскрашивания водой, чтобы оттенки краски плавно переходили друг в друга.

Дождаться пока высохнет краска. Рисунок раскрашенный пастелью нужно сбрызнуть лаком для волос, чтобы частицы мелка не осыпались и не пачкали руки.
Черным фломастером обвести оконную раму по контуру, а также раскрасить кошку.
Белым корректором нарисовать звезды в небе и короткие шерстинки на спине и голове кошки.

Такой рисунок подойдет для оформления страниц с записями о мечтах, рассуждениях или о снах.

Черно-белые картинки

Бесцветные картинки чаще всего используют для украшения страниц с описанием грустных воспоминаний и с рассказами о неудачных днях, потому что чёрно-белая стилистика рисунков напоминает о лёгкой меланхолии.

Рисовать такие картинки можно простыми карандашами, гелиевыми и шариковыми ручками или чёрными фломастерами. Дополнить грустные надписи можно изображениями грустных людей. Например, нарисовать девушку, которая закрыла лицо руками. Для работы потребуется простой карандаш, ластик и чёрный фломастер.

Как рисовать:

Девушка на картинке будет изображена по пояс. Нужно отметить верхнюю линию рисунка и нижнюю.
Разделить область для рисования пополам. Эта линия должна быть едва заметной, чтобы потом её было легко удалить ластиком.
Короткими чёрточками отметить верхнюю часть головы, подбородок, шею и плечи.
Сделать набросок круглой головы, обозначить линию плеч и положение рук.
Прорисовать форму прически и одежды. Можно нарисовать девушке широкую футболку.
Прорисовать такие детали как ногти, браслеты на руках, полоски и складки на футболке.
Нарисовать лицо. Так как его часть будет закрыта руками, можно изобразить только 1 бровь и закрытый глаз с ресницами.
Оформить причёску, прорисовать резинки для волос или косы.
Обвести рисунок по контуру чёрным фломастером. Там, где требуется провести тонкую линию, давить на фломастер не нужно. Его кончик должен едва касаться бумаги.
Раскрасить волосы девушки простым карандашом, а затем чёрным фломастером выделить пряди.

Простым карандашом можно добавить тени, чтобы рисунок получился объёмным. Нужно аккуратно заштриховать границы тела и одежды, а также изобразить на футболке тень от рук. Все штрихи аккуратно растереть пальцами. Накладывать тени следует пред финальной обводкой, чтобы случайно не растереть краску от фломастера.

Крутые картинки

Идеи для ЛД (рисунки, которые сложно нарисовать можно легко перенести на бумагу если прислонить лист к экрану компьютера, и обвести картинку карандашом) с крутыми рисунками подходят для тех страниц, где заканчивается один раздел дневника и начинается другой.

Например, каждый новый месяц в дневнике можно рисовать картинки, которые ассоциируются с этим временем года. Для примера, в этом мастер-классе описано оформление страницы, после которой начинаются июльские записи.

Что потребуется для рисования:

цветные карандаши;
фломастеры;
простой карандаш;
ластик;
линейка.

Оформление страниц в ЛД временами года

Как рисовать:

По центру листа, от края до края, провести 2 горизонтальные параллельные линии простым карандашом. Расстояние между ними должно быть около 5 см.
Измерить ширину страницы и разделить её на 4. Поставить отметки на обеих линиях.
Соединить эти точки вертикальными линиями.
В каждом получившемся прямоугольнике нарисовать по 1 букве из слова «июль». Каждый символ должен быть округлым. Нужно стараться, чтобы буквы не выходили за начертанные рамки, тогда они будут одинаковыми по размеру.
Над буквами «И» и «Ю» нарисовать кисть вишни. Обе ягоды должны лежать на буквах. Изобразить веточки и листок.
За буквами «Л» и «Ь» нарисовать рожок с 2 шариками мороженного. Верхняя часть десерта должна выглядеть подтаявшей.
В верхнем правом углу нарисовать солнце с лучами.
Снизу от букв нарисовать тянущиеся вниз «веревочки», на концах которых привязаны разные предметы, напоминающие о лете, например, цветы, ягоды, сердечки, мороженное.
Ещё ниже можно подрисовать облако, внутри которого написать «+25 градусов».

Раскрасить все элементы можно по своему усмотрению. Сначала рисунок нужно заштриховать цветными карандашами, затем фломастерами подрисовать тени и выделить некоторые участки. В конце обвести рисунок черным фломастером.

Аниме

Рисунки в этом стиле популярны и узнаваемы. У персонажей аниме большие глаза и мелкие черты лица. У них угловатые и пышные прически, а также нежный румянец на щеках.

Аниме рисунками можно оформлять страницы личного дневника с повседневными записями и описаниями разных идей, изображая на лицах персонажей подходящие эмоции. В этом мастер-классе пошагово описана картинка с изображением девочки, которая подперла подбородок 2 руками, прищурилась и мечтает о чем-то приятном.

Для рисования потребуется:

простой карандаш;
цветные карандаши бежевого и серого цвета;
коричневый, серый, розовый и чёрный фломастер;
ластик.

Как рисовать:

Простым карандашом сделать набросок. Сначала обозначить круглую голову, затем плечи, положение рук и спину.
Нарисовать форму причёски. Волосы девочки распущены, у неё густая, длинная челка, закрывающая брови.
Нарисовать кофту с капюшоном. Прорисовать рукава, веревки от капюшона и большие складки.
Проработать более мелкие детали. Нарисовать пальцы, добавить складки и изгибы на кофте. Прорисовать пряди на челке и по всей длине волос. Добавить несколько локонов, спускающихся на одежду.
Нарисовать лицо девочки. Поскольку её глаза зажмурены, их нужно изобразить в виде широких дуг. Внутренние уголки глаз должны быть шире, чем наружные. Над каждым глазом обозначить веко.

Хоть брови и скрывает челка, в аниме стиле их все равно часто рисуют, прямо поверх волос. Этот приём помогает лучше отобразить эмоции персонажа. У девочки высоко приподнятые, дугообразные брови.
Нос можно изобразить короткой вертикальной черточкой или галочкой.
Рот – это тонкая перевёрнутая дуга. Будто девочка улыбается поджав губы.
Румянец на щеках нужно изобразить в виде 3 коротких штрихов под наклоном.
Слева от девочки нарисовать 3 маленьких сердечка.
Ластиком удалить все лишние линии.
Бежевым карандашом заштриховать лицо девочки. Там, где волосы заходят на лицо, нужно прорисовать тень, надавливая на карандаш чуть сильнее.
Серым карандашом заштриховать кофту. Тени на кофте выделить штрихами используя серый фломастер.
Коричневым фломастером закрасить причёску. Штрихи должны иметь такое же направления, что и рост волос.
Розовым фломастером закрасить сердечки и обвести черточки на щеках девочки, имитирующие румянец.
Чёрным фломастером обвести весь рисунок.

Обводку можно делать не только черной, но и цветной. Для этого потребуется подобрать фломастеры, которые будут оставлять линии на 2 тона темнее, чем основной цвет картинки или какой-нибудь её части. Например, лицо и руки девочки можно обвести светло-коричневым цветом, а волосы тёмно-коричневым.

Рисунки по клеточкам

Рисунки по клеточкам можно разделить на 2 типа: узоры и другие изображения. Узорами, нарисованными по клеточкам, часто украшают поля тетрадей.

Как нарисовать узор «косичка»:

Нужно провести короткую вертикальную черточку на 2 клетки.
Отступить вправо или влево на 1 клетку и начертить ещё 1 черту, параллельно предыдущей.
Сделать 3 черту.
Отступить вниз на 1 клетку и повторить все действия с 1 по 3 пункт.
Количество рядов с 3 чёрточками зависит от желаемой длины нарисованной косички.
Теперь нужно вернуться к самому 1 ряду и провести диагональную черту от конца 1 полоски к 2 полосе следующего ряда.
От 2 полосы 1 ряда провести полоски до верхушки 3 полосы 2 ряда.
От кончика последней полоски в верхнем ряду, провести черту до верхушки 1 полоски во 2 ряду. Полосу нужно прервать, когда она пересечётся с уже нарисованной линией, затем предложить её.

Рисовать диагональные полос нужно до конца косички. Получившиеся пряди можно раскрасить фломастерами в разные цвета. В таких узорах хорошо смотрятся контрастные и монохромные оттенки. По клеточкам можно нарисовать любой значок или фигуру. Получится эффект пиксельной картинки.

Как нарисовать сердечко:

Тонкой карандашной линией выделить квадрат, состоящий из 15 клеток в ширину и из 12 клеток в высоту.
Отсчитывать клетки нужно слева-направо. В 1 нижнем ряду закрасить черным фломастером 8 клетку.
Во 2 ряду отсчитать 6 клеток, 7 клетку закрасить чёрным, следующую красным, следом закрасить ещё 1 черным.
В 3 ряду пропустить 5 клеток, 6 закрасить черным, следующие 3 должны быть красными. После красных сделать 1 черную клетку.
Пропустить 4 клетки, 1 черная, 5 красных, снова 1 черная.
Отсчитать 3 клетки, 1 сделать черной, 7 закрасить красным цветом, следом закрасить 1 клетку черным.
Пропустить 2 клетки, 1 черная, 9 красных и 1 черная.
Пропустить 1 клетку, закрасить 3 клетку черным, 11 красным, следом закрасить 1 клетку черным.
Раскрасить клетки в 2 следующих рядах по аналогии с пунктом № 9.
Пропустить 1 клетку, 1 черная, 5 красный, 1 черная. 5 красный и ещё 1 черная клетка.
Отсчитать 2 клетки, 3 клетку закрасить черным, 3 следующие – красным, следующая клетка должна быть черной. Пропустить 1 клетку, закрасить 1 черным, 3 красным и 1 черным.
Отсчитать 3 клетки, следующие 3 клетки закрасить чёрным, пропустить 3 клетки, снова закрасить 3 черным цветом.

Пиксельными картинками можно украшать поля личного дневника или дополнять ежедневные записи. Такие рисунки хорошо смотрятся в углах страниц, а также на разворотах.

Животные

Идеи для ЛД (рисунки животных могут быть простыми или сложными в зависимости от художественных навыков человека, ведущего дневник) с изображениями зверей являются самыми популярными.

Животных в дневниках редко рисуют реалистичными, чаще им придают мультяшный вид, рисуя большие миловидные глаза и непропорциональные тела. Для примера можно рассмотреть изображение миловидного жирафа, у которого пятна в виде сердечек.

Для рисования потребуется:

простой карандаш;
ластик;
желтый карандаш;
желтый, черный и коричневый фломастер.

Как рисовать:

Простым карандашом наметить овальную форму головы.
Дорисовать шею, которая должна слегка расширяться ближе к телу.
Нарисовать короткое овальное туловище и 4 округлые ноги.
Дорисовать жирафу уши и рожки, обозначить копытца и провести дугу через нижнюю часть морды.
Нарисовать хвост с кисточкой.
Добавить большие, круглые глаза. Внутри каждого глаза обозначить блики.
Нарисовать конуры пятен в виде сердечек.
Желтым карандашом закрасить нижнюю часть морды, ту что под дугой.
Желтым фломастером закрасить тело жирафа, не заходя на пятна.
Коричневым фломастером закрасить пятна, копыта и рожки. Обвести дугу на морде.
Черным фломастером обвести рисунок по контуру, обвести все пятна, прорисовать хвост и закрасить глаза.

Раскрашивая картинку фломастерами, всегда нужно начинать со светлых оттенков. Если сначала закрасить жирафу пятна, то потом можно случайно запачкать кончик желтого фломастера коричневым пигментом. Все следующие штрихи будут грязными.

Цветы

Идеи для ЛД (рисунки с растительными узорами лучше рисовать фломастерами и красками, тогда они будут ярче, чем карандашные) картинок с изображением цветов можно использовать для оформления главных страниц и дополнительных разворотов в дневнике.

Ещё цветочные узоры красиво смотрятся в углах листов. Для примера, можно рассмотреть пошаговый мастер-класс с рисованием цветов сакуры.

Для работы потребуется:

простой карандаш;
ластик;
светло-розовый и ярко-розовый фломастер;
светло-зелёный и тёмно-зелёный фломастер;
коричневый карандаш и коричневый фломастер;
желтый фломастер;
черная ручка.

Как рисовать:

Простым карандашом изобразить ветвь дерева с 3 мелкими ответвлениями. Рисовать ветви нужно плавными линиями, можно добавить бугры и сучки.
На каждом ответвлении обозначить по 3 тонкие веточки.
На концах этих веточек нарисовать цветы с 5 округлыми лепестками.
Можно подрисовать веточки с нераскрывшимися бутонами.
Рядом с цветами нарисовать листья.
Внутри каждого соцветия обозначить тычинки.
Дорисовать несколько оторвавшихся лепестков.
Стереть ластиком лишние линии.
Коричневым карандашом закрасить ветви.
Желтым фломастером закрасить тычинки.
Светло-розовым фломастером заштриховать лепестки, проводя линии от цента, не задевая тычинки.
Темно-розовым цветом закрасить бутоны и обвести каждый цветок по контуру.
Светло-зелёным фломастером закрасить все листья, затем обвести их по контуру тёмно-зеленым цветом.
Коричневым фломастером обвести ветви по контуру.
Чёрной ручкой обвести весь рисунок.

Нарисованные цветы лучше обводить чёрной ручкой, чем фломастером. Так линии получатся более тонкими и изящными.

Современные идеи для девочек

Тематическими рисунками можно украшать отдельные страницы. Например, список любимой музыки можно написать на дисплее нарисованного смартфона или плеера. Перечень фильмов, которые планируется посмотреть, можно украсить изображением стакана с попкорном.

Идеи для ЛД — рисунки

Красиво смотрятся разрисованные развороты страниц в начале каждого раздела дневника. Например, начало раздела с описанием планов и идей можно оформить 2 страницами розового цвета с изображением плывущего по воздуху кита.

Популярны хаотичные рисунки, выполненные в 1 цвете. Например, можно посвятить 2 страницы картинкам розового цвета и нарисовать там много маленьких изображений с разными предметами одного цвета: пончик, бант, лак для ногтей, мороженое и так далее.

Идеи рисунков для ЛД могут быть разными, и реализовывать их можно на свой вкус. Тематика картинок может совпадать со смыслом написанного или просто украшать страницу. Чтобы рисунки получались красивыми и не просвечивали с обратной стороны листов, нужно заранее подобрать блокнот с плотными страницами.

Видео о рисовании в ЛД

Идеи для ЛД рисунки :

рисунки по клеточкам, картинки для срисовки, новые рецепты любимых блюд, вдохновляющие цитаты, стихи, новые мечты и цели, список книг к прочтению

Личный дневник – это верный и надежный друг, на котором выросло не одно поколение успешных, творческих, романтических людей. Идеи для лд такие разнообразные, интересные, яркие и привлекательные, что сегодня каждый может оформить свои мысли наиболее эстетичным образом.

Для украшения дневника идеально подходят авторские рисунки, цветные и черно-белые распечатки, смайлики, наклейки и многое другое. Если вы умеете писать стихи, занимаетесь хенд-мэйдом и любите рисовать, оформление личного дневника не составит для вас никакого труда.

Однако и для тех, кто только лишь постигает премудрости рукоделия и делает первые шаги в образовательном искусстве и литературе, существует множество ярких идей и подсказок для лд: картинки для девочек, готовые рисунки и шаблоны, цитаты, стихи, срисовки, комиксы.

Как создать личный дневник самому: идеи 2021-2022

Чтобы украсить собственный личный дневник, можете воспользоваться авторскими рисунками, цветными либо черно-белыми распечатками, смайликами, наклейками и так далее. Если у вас есть способность по написанию стихов, вы увлекаетесь хенд-мэйд, обожаете рисовать, тогда для вас оформление дневника станет увлекательной работой.
Но, если вы только постигаете премудрости рукоделия, начинаете рисовать, писать стихи, для вас найдутся яркие, необычные подсказки для ЛЧ (личный дневник).
Идеи для личного дневника – это полезная, увлекательная работа. Благодаря ей вы сможете развить собственное воображение, фантазию. Вы создадите свое творение быстро и красиво.
Есть некоторые успешные варианты на 2021-2022 год. Один или несколько обязательно возьмите в качестве основы для поделки.

Для начала выберите основу для дневника. Вариантов существует несколько:

Классический метод создания ЛД. Превратите обыкновенную тетрадку в клеточку в необычное творение. Если вы планируете писать не часто, тогда возьмите тонкую тетрадь. Если же вам дневник нужен на каждый день, тогда вам понадобится тетрадка минимум на 80 листов. Какую тетрадку выбрать – в клеточку или линию, решайте сами. Но в тетрадке с клеткой вам будет комфортнее создавать схемы, разные графические рисунки. Обложку выберите нейтральную, поскольку вы ее будете украшать сами.

Классика Страничка из дневника

Сделайте ЛД, используя блокнот. Существует множество различный вариантов, которые вы сможете купить в магазине. Чтобы разместить рисунки, наклейки, либо коллажи, ориентируйтесь по вертикали. Записи размещайте горизонтально. Чтобы сделать универсальный дневник, возьмите ежедневник.

Блокнот Страница дневника

Возьмите большой альбом для основы, если вы обожаете рисовать или собираете коллекцию собственных зарисовок. Такой дневник подойдет вам, если вы создаете крупные коллажи по собственным желаниям.

Страница дневника

Для коллекционера подойдет дневник-папка. Сюда вы сможете класть разнообразные вырезки из журналов, а также интересные заметки о собственных кумирах. Если вы собираете тематические открытки, либо наклейки, этот вариант будет для вас комфортным вариантом. Дневник в виде папки сохранит каждую составную часть, которые могут выпадать из обыкновенного блокнота.

Альбом

Хотите изготовить необычное творение? Тогда в качестве основы для дневника возьмите офисную бумагу и нитки. Последними вы сможете соединить все листы.

Нитка и бумага

Самый удобный, практичный вариант – основа из бумаги в обложке их кожи. С таким ЛД вы не будете волноваться за оторванные листы либо измятые углы. Плотная обложка будет хорошей защитой, такой дневник вам прослужит долго.

Оформление личного дневника

Все мы знаем, что любой личный дневник начинается именно с обложки. Она привлекает внимание, настраивается на положительные эмоции. Чтобы изготовить самостоятельно обложку, воспользуйтесь нашими подсказками.

Обложку для личного дневника делайте прочную, так вы продлите изделию срок эксплуатации. Обложку укрепите, оберните, либо обклейте каким-то плотным материалом, бумагой. Можете для большей прочности изготовить дополнительную обложку, которую можно в любой момент снять.

Идеи

Добавьте страничку «Дни рождения подруг«, Дни рождения мальчиков«, Дни рождения родственников«.
Посвятите странички маме, папе, дедушке, бабушке, брату, сестре.
Запишите наиболее оригинальные анекдоты.

Страничка из дневника Страничка из дневника

Страничка из дневника Страничка из дневника Страничка из дневника

Страничка из дневника Страничка из дневника Страничка из дневника Страничка из дневника Страничка из дневника Страничка из дневника Страничка из дневника Страничка из дневника
Можно в дневник записывать пояснения к правилам по русскому языку, математике и другим предметам. Это очень пойдет на пользу вашей успеваемости. Пример:

Запись правил из школьной программы

Во время оформления обложки дневника воспользуйтесь рукодельными умениями, творческой фантазией. Далее вам помогут наши идеи:

Наклейте любимые фото, которые связаны с положительными воспоминаниями. Такие фотографии смогут вам поднять настроение.
Отличный вариант – коллекция позитивных картинок, коллаж из различных иллюстраций, позитивных высказываний.
Напишите на обложке любимые цитаты, отрывки их каких-то стихотворений. Буквы пишите любые: печатные, прописные, яркие из разноцветных ручек. Такие изречения смогут создать приятную атмосферу, вдохновят вас.
Украсьте обложку личного дневника яркими наклейками. Они вот почему удобные – если поверхность обложки гладкая, вы сможете быстро их поменять, прикрепить новые картинки.

Личный дневник идеи для оформления

Можно украсить обложку кружевами, квиллингом, интересными аппликациями.
Очень изыскано и красиво выглядит обложка, украшенная высушенными листиками и цветками. Выложите из них интересную композицию, закрепите (покройте лаком или заламинируйте).
Даже, если у вас отсутствуют навыки рукоделия, создайте нарядную обложку, используя подручные материалы. Подойдут пуговицы, стразы, оберточная бумага, ленточки, тесьма, искусственные цветочки и так далее.

Оформление

Вышивка

Альбом

Личный дневник

Украшение дневника

Нежный дневник

Формирование оригинальных страниц

Подберите оптимальную цветовую гамму, требуемое число листов. Расцветки могут различные – от светлых до темных тонов; При помощи ножниц можно придать различную форму страницам, дополнить их нежным кружевом либо закруглить; Подбирая титульный лист для дневника, отдавайте предпочтение плотным материалам; Дыроколом выполняются два отверстия с левой стороны, продевают в нем два кольца для соединения страниц. Если кольца отсутствуют, то можно связать страницы красивой лентой; Для создания страниц приобретите готовую тетрадь и создайте креативный дизайн.

Оригами на обложке личного дневника

Оригами считается незаменимой техникой во время оформления обложки личного дневника. Также техника подходит, чтобы украсить внутренние страницы. Необычно сложенные фигурки будут «изюминкой» любого ЛД. Только вы должны выбрать самые идеальные варианты.
Объемные и крупные фигурки будут смотреться неуместно. Лучше выберите «плоские» оригами небольших размеров, например, бантики, конвертики, рамки и так далее.
Вы сможете быстро изготовить фигурку-оригами. Тем более, что для личного дневника не нужно делать какие-то сложные композиции. Так, к примеру, обыкновенный веер, который вставлен между страницами, смотрится достаточно эффектно.

Объемно Красиво

Как оформить первую страницу личного дневника?

В особенном отношении нуждается начальная страничка личного дневника. Чтобы ее эстетично оформить, вы должны пользоваться теми же правилами, подсказками, которые применили для обложки. Но ее информационное оформление продумайте более тщательно.

Разместите на начальной странице следующее:

Свои личные сведения. Сделайте страницу, как в анкете, например, «вопрос-ответ». Разместите стандартные данные: сколько вам лет, ваши любимые увлечения и так далее.
Напишите что-то необычное. К примеру, перечислите собственные черты характера – какие вам нравятся, какие вы бы хотели поменять. Спустя некоторое время оцените перемены.
Перечислите самые запоминающиеся события своей биографии. Можете каждый раз дополнять полученный список.
Отличный вариант – страничка с настроением. Начертите на ней календарь. За каждый день ставьте определенную оценку. Нарисуйте смайлик, либо придумайте цветовую палитру отрицательных и положительных дней. Вы сможете потом анализировать то время, которое уже прошло.
Разместите на первой страничке удачные, забавные снимки. Они поднимут вам настроение, когда вы откроете дневник.
Откройте свой ЛД авторской работой – нарисуйте что-то красивое, сделайте аппликацию. В общем, просто фантазируйте.

Первая страничка Оформление дневника Первая страница ЛД

Начало дневника Страница из дневника студентки

Полезные записи

О себе Стихи для личного дневника Для первой странички личного дневника Стихи для личного дневника

Стихи для личного дневника Стихи для личного дневника Стихи для личного дневника Стихи для личного дневника Стихи для личного дневника

Страница из личного дневника Стихи для личного дневника Страничка из дневника Страничка из дневника

Цитаты и все то, что вдохновляет

Каждого человека что-то мотивирует, будь то история из жизни или сериала, прочитанная книга или фраза из модного журнала. Не стесняйтесь и обязательно запишите то, что вам нравится в ежедневник. Такие фразы будут вас вдохновлять, помогать двигаться вперед в тяжелые моменты.

В любом случае помните, что ежедневник – это то, что принадлежит только вам. Поэтому записывайте в него все, что посчитаете нужным. Это могут быть даже списки для похода в магазин, впечатления от нового вида чая или план того, как отпраздновать день рождения.

Необычные темы для личного дневника, любимые рецепты, цитаты, мечты

Если вы не знаете, какую тему выбрать для дневника, воспользуйтесь следующими идеями:

Цитаты. Тем для цитат существует множество. Поскольку все, что случается в вашей жизни, можно написать в дневнике. Записывайте постоянно цитаты, которые вам важны. Для этого подойдут классические книжки, известные фильмы, мудрые слова философов.

Цитаты

Для дневника

Молитва школьника Для личного дневника Для личного дневника

Для личного дневника Для личного дневника Для личного дневника Для личного дневника Для личного дневника Для личного дневника Для личного дневника Для личного дневника Для личного дневника Для личного дневника

Блюда. Рецепты различных блюд, которые вам больше всего нравятся. Их тоже записывайте в личный дневник. Фиксируйте самые простые рецепты, состоящие из обыкновенных ингредиентов. Так вы их сможете со временем выучить и готовить постоянно.

Рецепт вишневого пирога

Рецепты для девочек Рецепты для девочек Рецепты для девочек Рецепты для девочек Рецепты для девочек

Рецепт канапе

Путешествия. Для данной темы выделите особенную страничку. Поскольку записывать собственные ощущения, когда вы ездили в тот город либо страну, достаточно интересно. Можете еще зарисовывать свои ощущения на страницах дневника.

Путешествия

Мечты, заветные желания. Записывайте в дневник те вещи, которые вам больше всего необходимы. Так вы не забудете о важных деталях, покупках, желаниях.
Семейное дерево. Изучать собственный род иногда очень увлекательно. А вдруг в вашей семье есть известный человек, ученый или писатель. Это же классно! Также нельзя забывать о друзьях, поскольку они являются частью вашей жизни. Посвятите им отдельную страничку. Вспомните об их наилучших сторонах, успешных кличках, любимых воспоминаниях.
Спорт. Активный образ жизни всегда актуальный. В личном дневнике напишите график собственных тренировок, выполняйте упражнения регулярно. Наклейте снимки, которые вас будут мотивировать. Расскажите, в каких спортивных соревнованиях или состязаниях вы участвовали, опишите свой любимый спортивный кружок, фаворитов среди физических тренировок.
Домашние животные. Сегодня животные есть практически в любом доме. Каждый человек любит играть с питомцем. Вы же можете сделать отдельную страничку, написать на ней истории своих любимцев. Если у вас нет питомца, тогда выберите животное, которое мечтаете иметь. Напишите, как правильно ухаживать за питомцем, как с ним гулять и так далее.

Животные Идеи для личного дневника

Идеи для личного дневника Идеи для личного дневника Идеи для личного дневника

Идеи для личного дневника Идеи для личного дневника Идеи для личного дневника Идеи для личного дневника Анкета Страничка из дневника Страничка из дневника Страничка из дневника
Чтобы оформить страничку, воспользуйтесь флористическими орнаментами. Они украсят странички дневника. Если в какой-то день у вас было не очень хорошее настроение, нарисуйте темные цветы. Если же настроение было отличное – яркие, разноцветные.

Цитаты великих людей

Хорошие учителя создают хороших учеников. Остроградский М. В.

Учитель, могущий наделить своих воспитанников способностью находить радость в труде, должен быть увенчан лаврами. Хаббард Э.

Учитель, образ его мыслей — вот что самое главное во всяком обучении и воспитании. Дистервег А.

После хлеба самое важное для народа — школа. Дантон Ж.

Мы учимся всю жизнь, не считая десятка лет, проведенных в школе. Габриэль Лауб

Школа готовит нас к жизни в мире, которого не существует. Альбер Камю

Классы полны милых детей, но свет полон глупых людей. Гельвеций

Цель средней школы — средний ученик Тамара Клейман

Сколько бы я всего узнал, если бы не ходил в школу! Марк Твен

Я никогда не позволял, чтобы мои школьные занятия мешали моему образованию. Джордж Бернард Шоу

Директора школ обладают такой властью, которая премьер-министрам даже не снилась. Константин Мелихан

Интересные идеи картинок для зарисовок в личный дневник

Если вы ищите картинки для срисовки, тогда вам подойдут наши идеи. В нашей коллекции есть различные картинки для ведения ЛД на любые пожелания, настроения для юных девочек.
У нас есть простые рисунки для личного дневника. Они красивые, интересные. Есть также рисунки сложные, а какие вам нравятся, решайте сами.
Чтобы рисовать картинки, используйте краски, карандаши, фломастеры. В общем решайте. Уверены, что в нашем ассортименте вы точно сможете найти срисовки для личного дневника по душе.
Любой рисунок, который вам понравится, вы сможете сохранить на ПК, распечатать либо разукрасить. Однако лучше всего срисовать рисунок с монитора. В таком случае у вас получаться рисунки намного интереснее.

Картинки

В дневник Ярко Идеи Рисунки для личного дневника

Наклейки Картинки

Наклеить Срысовать

Котики Надписи В дневник

Рисунки для личного дневника Рисунки для личного дневника

Любимые блюда

Если любите путешествовать, бывать в новых местах и предпочитаете вкусно покушать, обязательно делайте заметки с интересными рецептами, названиями вкусных блюд и напитков. Подключайте фантазию, рисуйте, используйте самые разные наклейки и стикеры. Все это поможет разнообразить раздел о еде.

Не забывайте следить о количестве воды, которую вы должны выпивать в день. А лучше делайте соответствующую заметку в дневнике.

Идеи картинок по клеточкам для дневника

Картинки, нарисованные по клеткам – это лучший метод украсить личный дневник. В интернете вы сможете отыскать множество картинок и для девочек, и для мальчиков. Их вы сможете изобразить на листах в клеточку.
Для таких случаев подходят лучше всего смайлики. Кроме того, существует множество различных «математических инструментов». Ими вы сможете пользоваться каждый день. В сети можно отыскать разные блоги, как правильно пользоваться такими инструментами.
Картинки по клеткам бывают различных размеров: от номеров до нескольких сотен различного вида. Не имеет значения, о чем именно вы будете писать в собственном дневнике.

У нас вы сможете найти интересные рисунки, которые могут подойти для любого случая:

Возможно, вы любите писать в дневнике о домашних питомцах.
Может вам понравится описывать героев любимых мультипликационных фильмов.
Можете в дневнике написать то, что вы получили долгожданное сообщение или письмо.
А, возможно, вы часто рассуждаете о том, какая сейчас мода, косметика, каких исполнителей вы слушаете или вы что-то вкусное кушаете.

Выберите самостоятельно идеальный рисунок из нашей коллекции. Украсьте данным рисунком какую-то запись – так вы сможете оформить собственный личный дневник быстро, просто и красиво.

По клеткам Маленькие Котики

Цели и мечты

Ежедневник – это в первую очередь личное пространство. Поэтому первое, что стоит в него записать – ваши цели. Это могут быть важные мечты и планы на год .

Вы можете выделить специальные листы для записи текущих дел и целей, к которым стремитесь.

Можно к ним делать комментарии или пометки о том, что понадобится для достижения. Спустя определенное время будет очень интересно читать и отмечать, что получилось сделать, а что нет. Это очень полезная практика, поскольку позволяет проанализировать свои действия, выделить важное и первостепенное для себя, а также понять то, куда стоит двигаться дальше.

Список книг к прочтению, и фильмов для подростков

Если вы обожаете читать, смотрите много фильмов, тогда можете внести список любимых картин или произведений в личный дневник.

Популярные книги для подростков:

«Голодные игры». Автор произведения Сьюзен Коллинз. По этой книжке был снят даже фильм.
«Без надежды». Автор Колин Гувер. Книга достаточно эмоциональная.
«Говори». Автором книжки является Лори Андерсон. В данном романе описываются отношения подростков.
«Круг воронов». Написала книжку Мэгги Стивотер. Данное произведение могут читать юные фанаты фантастики.
«Ангел для сестры». Автор книги Джоди Пиколт. Роман опубликовали несколько лет назад. Но несмотря на это произведение смогло завоевать популярность многих подростков.
Девочка подросток 12, 13, 14 лет: какие книги, фильмы, мода, одежда, комната, стрижки, косметика, диета, упражнения, игры, витамины нужны девочке подростку?
Какие книги читать детям: список литературы по возрастам

Самые лучшие кинокартины для подростков:

«Шазам». Фантастическая комедия про супергероев.
«Наше последнее лето». Фильм рассказывает о школьных друзьях, которые вскоре должны поступить в колледж.
«После». Мелодрама о подростках, которые живут в параллельных вселенных.
«Идеальное свидание». Комедия. В фильме рассказывается про университет, любовь, студентов.
«Приведение». Кинолента о том, как один студент ежедневно оказывается в разных телах.
Фильмы и сериалы для девочек подростков. Лучшие русские и диснеевские фильмы для подростков смотреть бесплатно

Мы описали лишь некоторые фильмы и книги, которые вы можете просмотреть сами и внести их в дневник в категорию «любимые».

Из чего сделать ЛД

Можно приобрести «безмолвного друга» в книжном магазине, а можно завести обычную тетрадку, но это скучно и не интересно. Лучше сделать его самому. Многие спросят, а как сделать личный дневник своими руками, чтобы он пришелся по вкусу.

В этом нет ничего сложного, самое главное необходимо подумать, что бы хотелось в нем видеть, и просто подключить фантазию.

К примеру, его можно оформить в виде:

Альбома для рисования. Он поможет не только вести записи, но и выполнять в нем всевозможные рисунки. Можно конечно рисовать и в обычной тетради, да только качество бумаги в ней оставляет желать лучшего, все картинки в личном дневнике будут просто просвечивать, и портить внешний вид страницы. Альбом для этого и берется, чтобы все художества, изображенные в нем, не мешали просмотру основной информации дневника.
Папка. Для любительниц что-то коллекционировать идеальным вариантом для ЛД станет папка-дневник, где можно будет собирать понравившиеся вещи или глянцевые вырезки.
Старая книга. Данный вариант подойдет для неординарных особ, которые любят все эксклюзивное. Основная фишка состоит в том, что все записи и рисунки для дневника придется вклеивать уже на сами страницы. Лучше если книга будет без иллюстраций, в противном случае стоит их просто удалить.

Если ЛД планируется на долгие годы, соответственно со временем он станет довольно объемным и увесистым, чтобы этого избежать, можно в качестве страниц использовать офисную бумагу.

Она значительно легче и соответственно количество в разы можно увеличить, не отягощая ее. Чтобы он не потерял свою индивидуальность необходимо продумать оформление, особенно какая будет обложка.

Видео: Оформление личного дневника

Крутые слова для подростков: крутые словечки, крутые слова для пацанов, пацанские цитаты, пацанские статусы, пацанские цитаты про брата
Как измениться в лучшую девушке, парню, подростку? Как изменить свою внешность с помощью силы мысли? Хочу изменить внешность — с чего начать?
Чем заняться на карантине взрослым и детям, школьникам и подросткам? Что посмотреть из фильмов во время карантина, какие книги почитать на карантине? Можно ли заниматься спортом во время карантина?
Квест для подростков 14-16 лет: примеры сценариев
100 интересных фактов о любви и отношениях подростков, взрослых: описание
Квест для детей 10-12 лет: задания и сценарии
29 полезных советов школьникам, мотивация в учебе, как хорошо учиться в школе?
Психосоматика — акне на лице: описание, причины и решение проблемы
Советы для девочек и девушек подростков 10-16 лет: о стиле, уходе за телом, руками, волосами, лицом, вопросы интимной гигиены: секреты красоты
10 важных советов подросткам девочкам. Полезные советы психологов подросткам 10-17 лет
Бьюти лайфхаки и моды для девушек, девочек подростков, женщин по уходу за собой: советы, секреты и правила красоты, здоровья и моды. Лайфхаки для ресниц, бровей, глаз, губ, лица, макияжа, косметики, пудры, кожи, волос, от прыщей
Косметичка девушки. Что должно быть в косметичке? Советы для девушек, женщин, подростков
Подростковая уличная мода весны-лета-осени-зимы 2021-2022 года: молодежные тенденции, модные образы, советы, 120 фото. Что можно модное из одежды носить девочкам и мальчикам подросткам и молодежи?
Детская мода для девочек 2021-2022 года: тенденции на весну-лето, осень-зиму, стиль и модели красивой детской одежды, образы, фото. Как купить модную детскую одежду для девочек в интернет магазине: ссылки на каталог 2021-2022 года
Школьная мода 2021-2022 года: модные тенденции, образы, 70 фото. Модные в 2021-2022 году школьные формы, платья, блузки, костюмы, обувь для детей и подростков: фото, модные образы, луки
Как красиво извиниться перед мамой, попросить у мамы прощения своими словами, если сильно обидела: слова и примеры извинений, письмо, советы

Распечатки для лд цветные веселой какашки.

Подборка цветных и черно-белых картинок для вашего личного дневника

Личный дневник – это верный и надежный друг , на котором выросло не одно поколение успешных, творческих, романтических людей. Идеи для лд такие разнообразные, интересные, яркие и привлекательные, что сегодня каждый может оформить свои мысли наиболее эстетичным образом.

Для украшения дневника идеально подходят авторские рисунки, цветные и черно-белые распечатки, смайлики, наклейки и многое другое . Если вы умеете писать стихи, занимаетесь хенд-мэйдом и любите рисовать, оформление личного дневника не составит для вас никакого труда.

журнальные вырезки, наклейки, смайлики, фотографии .
Идея с рамочками очень по душе юным девушкам, поскольку они любят выделять самые важные и волнительные моменты своей жизни . Для распечатки рамочек можно использовать цветной принтер, а если такого нет, просто сделать рамочку на обычном и разукрасить фломастерами, красками, гелевой ручкой или карандашом.

Легкий способ рассказать о себе — сделать мини-викторину с ответами на самые разные вопросы : мой любимый цвет, фрукт и т. д. Таким же образом вы можете оформить свои любимые цитаты, афоризмы, планы на будущее. Что можно написать в дневник еще, более подробно мы расскажем далее.
К примеру, вы можете сделать календарь настроения, страничку интересов, музыкальную страничку , маленькую доску визуализации, на которой поместятся все ваши мечты, желания и планы на будущее.

Идеи для личного дневника применимы и в оформлении обложки. Несмотря на то, что эту вещь будете видеть исключительно вы, она должна быть приятной на ощупь, радовать глаза, душу и сердце.

Странички дневника также можно украсить с помощью оригинальных изобразительных приемов.

А если рисовать не хочется – прикупите бумагу для скрапбукинга .
Отдельные странички дневника можно оформить в любимом цвете. Так у ваших мыслей и желаний появиться своя «цветная» тема .Еще одна идея – письмо в будущее . Напишите себе послание и раскройте его в определенный день и в определенный год. Вы будете приятно удивлены.

Картинки, рисунки, распечатки для личного дневника

А что, если добавить к привычным текстам и стихам, цитатам и смешным историям немного визуализации?
Если, к примеру, вы пишите в дневнике о своих увлечениях и небольших страстях, вы можете нарисовать свое любимое занятие или его атрибутику: спорт, рукоделие, путешествие, книги. Вместо того, чтобы писать: «Я обожаю море» или «Я люблю шоколад» можно ведь это нарисовать! Поверьте, когда вы вернетесь к своему бумажному другу через несколько лет или даже несколько десятилетий, вам будет гораздо приятней пересмотреть сотни картинок, ежели перечитать десятки тысяч слов. Тематика рисунков и картинок может быть совершенно разной, все зависит от вас и ваших желаний. Рисунки для лд условно (повторяем, условно) можно поделить на множество рубрик и подразделов, зависимо от предпочтений, желаний, вкусов и даже настроения хозяйки дневника.

Тематика рисунков для дневника

Путешествия
Хобби
Еда, сладости
Напитки
Любовь
Гаджеты
Соцсети
Домашние питомцы, животные
Мультики
Единороги
Гардероб, мода и стиль
Косметика
Времена года
Планеты, небесные тела

Этот список можно продолжать до бесконечности, дополнять его своими рисунками, фантазиями, идеями. Предлагаем несколько «вкусных», динамичных, милых, восхитительных и, как говорят сегодня, «мимимишных» рисунков для украшения дневника.

Как показывает практика, гораздо легче делать рисунки по клеточкам, однако вы можете использовать и блокноты в линию, и стандартные листы А4.

Если вы поклонник или поклонница мультсериала «Гравити фолз» , нарисуйте веселую пышку Мэйбл на страничка своего дневника. Она принесет вам удачу.

Для того чтобы вести свой дневник, не обязательно уметь и любить рисовать.

Если вы желаете сэкономить время на рисунках и сосредоточится, например, на подаче текста, для оформления используйте распечатки для лд.
Эти шаблоны вы можете распечатать на цветном принтере, вырезать и наклеить в дневник или же сделать их черно-белыми и разрисовать самостоятельно.

Украсить страницы вашего дневника помогут милые картинки, смешные стикеры, прикольные надписи или смайлы. Прелесть распечатанных картинок в том, что вы моежете без лишних усилий подобрать красивый шрифт, выбрать прикольный принт и «поселить» на страничках своей сокровенной книги множество новых невероятных героев.

Постоянным жителем/символом/хранителем вашего дневника может стать единорог или сова . Нарисовать подобное чудо можно своими руками, а можно распечатать на принтере готовый шаблон.

О чем писать в личном дневнике?

Помимо своих ежедневных дел и планов, можно рассказать о себе, своих друзьях, вкусах .Напишите, за что вы любите лето и прочие времена года.
Дневник – это ваш маленький сундучок вдохновения. Храните в нем любимую музыку, фильмы, видеоигры, фото и другие вдохновляющие вас вещи.
Если вы только начали вести свой лд – идеи для лд помогут вам наполнить его полезной, интересной и самой актуальной информацией.

Первая страница вашего дневника может выглядеть примерно так.

Или так. Это же ваш дневник, в нем вы имеете право устанавливать свои порядки . И немного побыть категоричной.
И помечать о Париже .
Ни один личный дневник не обходится без поэзии.

И без цитат.

И без милых философских записей.
И без виртуальных путешествий.
И без приколов.

Рассказать немного о себе, своем настроение и целях хочет каждый. Ведь это покажет другим людям: друзьям и незнакомцам, что мы из себя представляем, какие у нас взгляды на жизнь и к чему стремимся. Но личный дневник можно использовать и еще для одной задачи – отдохнуть и развлечься. Особенно это важно для девушек, и особенно, если ей 12 лет. И для этого есть картинки для личного дневника. Простые, красивые и лёгкие рисунки в дневнике – это особый стиль, следовать которому приятно.

Что предлагает наш сайт? Рисунки для лд для срисовки. Это – отличная помощь для всех, кому важно не просто заполнить пространство, но придать своим записям презентабельный вид. Что поможет украсить дневник, оформив его в красивые рисунки и изображения? Наша подборка замечательных картинок!

Всегда свежие идеи;
Только легкие рисунки, картинки: по клеточкам для личного дневника;

Для девочек и мальчиков варианты;
И то, что порадует многих: лаконичные картинки для лд черно-белые.

За вами, наши дорогие посетители, выбор! Можно скачать и распечатать, а так же, срисовать разные рисунки.

Идеи для иллюстрирования своих записей

Какие есть картинки для личного дневника? Например, стоит подумать о размере. Какие вы хотите иллюстрации? Маленькие или большие? В полную страницу или, как дополнение к тексту? Рисунки карандашом или что-то яркое? Эксклюзив, что отображает ваш собственный мир или шаблон, понятный для многих? а может быть они должны быть няшные или, в поддержание темы ваши рисунки для личного дневника для срисовки прикольные?

И у нас версий не мало, и все они достаточно интересные и разнообразные. Главное, что все это красивые картинки для лд, с сюжетной подачей. Наша команда понимает, что все наши гости разные, с огромным кругом интересов и со всевозможными желаниями, яркими талантами и возможностями. И для каждого стараемся подготовить свои, подходящие их личности идеи для лд .

Только для вас! Вариант срисовывания по клеткам

Только актуальные варианты картинок для лд, то, что в этом году интересно всем, то, что в личный дневник мечтает занести каждый. Вот, что предлагаем. Для этого мы упростили вашу задачу до минимума, у нас рисунки по клеточкам для личного дневника. С этой техникой очень просто дается срисовывание. Только бери и распечатывай для срисовки легкие и красивые картинки для лд.

Рисунки по клеточкам для личного дневника это отличная помощь тем, кто хочет самостоятельно выполнить работу, но недостаточно ловко владеет искусством живописи. Тогда кажется, что все срисовки лёгкие, если поэтапно двигаться, чтобы получить картинки по клеточкам для личного дневника. Техника повторения, позволяющая получить качественные рисунки по клеткам для личного дневника, достаточно популярна. Стиль легкий настолько, что результат обязательно порадует.

Иллюстрации на разную тему

Картинки для лд для срисовки, что есть в коллекции нашего сайта, подходят, как для девушек, так и для юношей, как для совсем юных маленьких девочек и мальчиков, так и для более взрослых молодых людей. Разные тематики дают множество возможностей для тех, кто хочет оформить свои записи, придав им интересный вид. Рисованные варианты рассказа о себе и своих интересах – то, что так важно для того, чтобы сюжет любого рассказа был более интригующим и наглядным, а при необходимости, и откровенней, искренней.

Нарисованная история лучше воспринимается и запоминается. О чем бы ни велось повествование, оно будет преподнесено не скупо и сухо, исключительно только в буквенном варианте, но и при помощи живописи, передающей образы.

Черно-белые изображения

Как нарисовать по клеточкам, мы легко поняли и научились. А теперь можно перейти к более интересным версиям. Например, вот вам задание, нарисуйте картинку без красок, только карандашом. Это достаточно занятное дело. Но лучше, если делать его с нами, при помощи тех моделей, что представлены в готовом виде на нашем ресурсе. Так видно конечную цель и легко понять, как работать.

Личный дневник, которые сделан и украшен своими руками, гораздо ценнее покупного

Безусловно, любой дневник можно купить, сейчас в магазинах очень много самых разнообразных вариантов для любого возраста. Есть для маленьких принцесс и девушек постарше. Некоторые идут с затейливыми рисунками и графиками, а некоторые даже имеют ключ, который спрячет от посторонних глаз тайны любой девочки. Но хранилище мыслей можно сделать своими руками.

Из чего можно сделать такой дневник:

воспользоваться уже готовым изделием и просто подогнать его под себя;
переделать любой блокнот;
использовать конверт и вкладывать в него исписанные вашими мыслями листы;
странички чистой офисной бумаги скрепить любым способом и сделать свое личное хранилище для тайн;
распечатать заготовки с нужным дизайном, и соединить их воедино.

Личный дневник для девочки плюс шкатулка (видео)

Как сделать личный дневник своими руками: несколько идей

Поделки — это всегда интересно и индивидуально. Как раз то, что нужно для личного дневника. Идеи для его создания могут быть самыми разнообразными.

Офисная бумага

Дневники из нее легкие и простые, а дизайн каждая девочка подбирает под себя. Бумагу можно оставить в формате А4 и просто прошить красивыми нитками или лентой. Достаточно проделать в ней дыроколом отверстия и соединить. Украсить титульный лист можно красивой надписью, а для придания формы либо сделать его из картона, либо склеить между собой несколько листов.

Его также можно украсить оригами или распечатать красивые и интересные рисуночки, которые подходят под настроение. В начале или конце изделия закрепить конвертик, в который можно складывать памятные и дорогие вещи.

Такие дневники легко сделать

Титульный и финальный лист дневника можно заламинировать, так распечатки не потеряют свой внешний вид, да и само изделие будет прочнее.

Переделка блокнота

Даже если есть возможность купить самый красивый блокнот, который станет хранилищем тайн, то его всегда нужно подгонять под себя.

Варианты изменения напрямую зависят от оригинала, но их можно сделать следующими:

перенести на страницы милые и самые дорогие картинки и вырезки из любимых журналов или газет;

сделать яркие закладки, которые облегчат поиск нужной информации;
для девочек постарше можно сделать график менструального цикла, чтобы контролировать этот процесс, ведь сейчас он может быть нестабильным;
приклеить конверты, которые будут хранить любимые мелочи или даже первые украшения;
страницы можно разукрасить под настроение, краской, цветной бумагой или даже цветным скотчем;
переписать любимые стихи или крылатые фразы, которые отражают ощущения или мысли.

Оригами для украшения личного дневника

Картиночки любимого дневника можно выполнить в технике оригами. Это может быть конверт или более сложная фигура, которая будет не просто декоративным элементом, а секретом, хранящим тайну.

Для настроения можно придать им любую форму:

цветок;
животное;
веер;
коробочка;
водопад и подобное.

Делаем веер

Его чаще всего ставят либо между титулом и начальной страницей, а можно украсить им ту страницу, которая важнее всего. Для веера нужно взять цветную бумагу, клей-карандаш или двухсторонний скотч, линейку.

Остальные декорации делать по желанию, отталкиваясь от базы, которую формируют так:

Вырезают лист такой ширины, которая не будет превышать 2/3 основных листов дневника.
Его длина должна превышать ширину как минимум в 3-4 раза.
С помощью линейки согнуть лист в веер.
Соединить его нижнюю часть с помощью клея.

Делаем веер

Края веера приклеить к страницам дневника, максимально близко к их соединению.

Делаем водопад

По факту это красивые листы для заметок, которые наклеивают на основной лист. При этом нижний листочек должен наполовину закрываться верхним. Количество таких листов может быть каким угодно. Чаще всего на верхних листах пишут что-то общее, а сокровенное на той части, которая будет им закрыта.

Их можно делать из цветной бумаги, обычной, а разукрасить так, как нравится.

Можно сделать часть листов цветными, а часть белыми, чередуя их по шахматному принципу.

Поделки для личного дневника

Тут вас также ограничивает только фантазия, но самыми популярными считаются следующие варианты:

красивый бант или сердце, которое можно сделать в технике оригами или в натуральном виде или лент или других декоративных элементов;
закладки любой формы и цвета как из бумаги, так и других подручных материалов;
сердце из формы ладошки;
тыквенную голову на Хеллоуин;
смешную открытку;
рисунок любимого героя из мультфильма, книги или фильма;
конверт.

В поделках для дневника вас ограничивает только фантазия

Как сделать конвертик для личного дневника?

Вариантов и тут очень много. Можно воспользоваться красивым готовым конвертом из канцелярии, который одной стороной нужно будет приклеить к дневнику.

Иногда сложенный в конверт лист цветной бумаги может стать отличной альтернативой магазинному изделию.

Также его можно сшить, связать, как кармашек, который нужно будет любым способом присоединить к дневнику. Проще всего взять квадратный лист, и свернуть его края к центру, хорошо пройдясь по ним линейкой.

Для дневника можно сделать не только конверт, но и кармашек

Можно сделать кармашек, который нужно будет не только приклеить к дневнику, но и сделать верхний клапан для него, чтобы вещи не высыпались, если дневник перевернуть.

Дизайн страничек и милые распечатки для дневника

Лучше всего делать странички в дневнике тематическими . Например, одна из них будет посвящена друзьям, вторая любимой книге или фильму.

Тайную информацию можно отметить особым дизайном. Так, любовные моменты можно оформить в розово-красной гамме, с разными сердечками или цветочными элементами.

Информацию о школе и успехах в ней так же можно выделить тематическими элементами. Это может быть тетрадный лист, нарисованная линейка или парта, распечатка или наклейка со школьной тематикой.

Все, что касается здоровья, можно отметить красным крестом или вырезкой врача. Что бы ни было выбрано, это личное, и должно быть милым сердцу.

Идеи личного дневника для девочки (видео)

Личный дневник девочки — это хранитель ее прошлого. Пройдут года, и все переживания можно будет «обновить», перечитав дневник. Чаще всего то, что было таким серьезным и глобальным в юном возрасте, вызывает только улыбку. Маленькие секреты, большие тайны — все, что так важно для сердца маленькой принцессы. Поэтому не скупитесь на идеи для личного дневника, ведь это будет личный портал в прошлое.

Много ли у вас сокровенных мыслей и тайн? Не любые из них можно рассказать кому-то, для такой информации существует личный дневник. Приобрести готовый не составит труда, но оформленный самостоятельно ежедневник – это как ваш дом, лучше все сделать в нем своими руками, с любовью. Как можно оформить личный дневник красиво?

Идеи для оформления личного дневника

Обязательно дайте разгуляться собственной фантазии в создании идеи для личного дневника своими руками. Красивый и аккуратно выполненный, он станет для вас лучшим другом, который хранит ваши секреты и раздумья. Как сделать оригинальными странички для личного дневника:

Определитесь с цветовой гаммой тетрадки и в соответствии с ней подберите необходимое количество листов. Это могут быть разноцветные листочки, радужное оформление из 7 цветов, пастельные тона, имитация залежалых листочков. Не избегайте и темной расцветки: на такие странички можно будет прикрепить конверты, наклейки, картинки или разделять ими периоды написания.
Страницы можно фигурно вырезать по краям, придать им интересную форму: кружева, закругленные уголки.
Выберите два листа для обложки (титульный и задний) и разместите их сверху и снизу стопки.
Возьмите дырокол и все странички пробейте так, чтобы на каждой было с левой стороны по два отверстия для сшивки страниц. Возьмите 2 колечка с учетом толщины ежедневника, проденьте их, чтобы соединить листы в готовый дневник.
При желании можно купить красивую тетрадь, продумать только ее внутренний дизайн.

Что касается вопроса, как оформить личный дневник для девочек, то тут важно не только разрисовать, но и тщательно продумать содержание блокнота. Вы можете сделать разделы для:

мотивирующих цитат, мыслей;
планов и желаний на будущее;
достижений и жизненных неудач;
фиксирования важных событий, дат;
записей происходящего за день;
хороших воспоминаний;
полезных «напоминалок»;
фотографий;
вырезок из журналов и газет.

Интересно сделать потайные кармашки легко, прикрепив вырезанный из прозрачного пластика кусочек или приклеив на любую из страничек конверт. Так вы скроете дорогую вам фотографию или информацию «не для чужих глаз». Еще одна идея для личного дневника своими руками – это тематика: о жизни вашей семьи, лично вашей, о ребенке, карьерных целях, достижениях.

Что нарисовать

Если вам интересно, как украсить личный дневник рисунками, то здесь все зависит от ваших художественных навыков. Красивые рамки страниц выполняются из маленьких листочков, цветов или просто при помощи линии градиента. Можно выделить отдельные страницы, нарисовать портрет, героев обожаемых мультфильмов, пейзаж, натюрморт. Красиво будет, если украсить каждую страничку нарисованным фруктом, ягодами, яркими овощами, бабочками, божьими коровками.

Если это дневник о достижениях ребенка, то используйте вариант рисунка, сделанный вашим малышом самостоятельно. При хороших художественных задатках можно создать свою раскраску, зарисовки карандашом, украшать листы узорами, прикрепить маленькие рисуночки на стикерах. Загадочный силуэт элегантной дамы, герой из кинофильма – рисуйте, то что любите, чем мотивируетесь.

Как украсить личный дневник

В мире творчества есть масса идей для личного дневника своими руками – это оригами, скрапбукинг, аппликации:

Яркую аппликацию в ЛД можно выполнить из пуговиц, цветной бумаги, картона, ватных дисков, палочек, всяческих лент, блесток.
Вырезки из газет и журналов легко сделать в виде экрана телевизора или груза, который везут маленькие самолетики.
В технике оригами есть много вариаций: птички, цветы, бабочки, маленькие бантики, конвертики.

Видео

твой личный дневник. Что такое ЛД в вк (Личный дневник)

Личный дневник – это верный и надежный друг , на котором выросло не одно поколение успешных, творческих, романтических людей. Идеи для лд такие разнообразные, интересные, яркие и привлекательные, что сегодня каждый может оформить свои мысли наиболее эстетичным образом.

Для украшения дневника идеально подходят авторские рисунки, цветные и черно-белые распечатки, смайлики, наклейки и многое другое . Если вы умеете писать стихи, занимаетесь хенд-мэйдом и любите рисовать, оформление личного дневника не составит для вас никакого труда.

Личный дневник хранит не только ваши секреты, переживания, мечты. На страницах дневника протекает ваша жизнь, которую так хочется украсить, улучшить, разнообразить. Если вы все еще думаете, как оформить личный дневник, используйте для украшения журнальные вырезки, наклейки, смайлики, фотографии .
Идея с рамочками очень по душе юным девушкам, поскольку они любят выделять самые важные и волнительные моменты своей жизни . Для распечатки рамочек можно использовать цветной принтер, а если такого нет, просто сделать рамочку на обычном и разукрасить фломастерами, красками, гелевой ручкой или карандашом.

Картинки, рисунки, распечатки для личного дневника

Выражать свои мысли и мечты мы привыкли словами и предложениями. Дневнику мы доверяем свои радости и печали, делимся с ним сокровенным и рассказываем ему о наших планах. Некоторые пишут в нем ежедневно, а кто-то фиксирует лишь яркие и запоминающиеся моменты жизни. А что, если добавить к привычным текстам и стихам, цитатам и смешным историям немного визуализации?
Если, к примеру, вы пишите в дневнике о своих увлечениях и небольших страстях, вы можете нарисовать свое любимое занятие или его атрибутику: спорт, рукоделие, путешествие, книги. Вместо того, чтобы писать: «Я обожаю море» или «Я люблю шоколад» можно ведь это нарисовать! Поверьте, когда вы вернетесь к своему бумажному другу через несколько лет или даже несколько десятилетий, вам будет гораздо приятней пересмотреть сотни картинок, ежели перечитать десятки тысяч слов. Тематика рисунков и картинок может быть совершенно разной, все зависит от вас и ваших желаний. Рисунки для лд условно (повторяем, условно) можно поделить на множество рубрик и подразделов, зависимо от предпочтений, желаний, вкусов и даже настроения хозяйки дневника.

Тематика рисунков для дневника

Путешествия
Хобби
Еда, сладости
Напитки
Любовь
Гаджеты
Соцсети
Домашние питомцы, животные
Мультики
Единороги
Гардероб, мода и стиль
Косметика
Времена года
Планеты, небесные тела

Для того чтобы вести свой дневник, не обязательно уметь и любить рисовать. Если вы желаете сэкономить время на рисунках и сосредоточится, например, на подаче текста, для оформления используйте распечатки для лд.
Эти шаблоны вы можете распечатать на цветном принтере, вырезать и наклеить в дневник или же сделать их черно-белыми и разрисовать самостоятельно.

О чем писать в личном дневнике?

Основой личного дневника все же остается глубокая смысловая нагрузка. Каждый автор, конечно же, сам решает, о чем ему писать и какие темы поднимать в своем дневнике. Осмелимся, все же, дать несколько советов и расширить богатейшую тематику личных дневников.
Помимо своих ежедневных дел и планов, можно рассказать о себе, своих друзьях, вкусах .Напишите, за что вы любите лето и прочие времена года.
Дневник – это ваш маленький сундучок вдохновения. Храните в нем любимую музыку, фильмы, видеоигры, фото и другие вдохновляющие вас вещи.
Если вы только начали вести свой лд – идеи для лд помогут вам наполнить его полезной, интересной и самой актуальной информацией.

Первая страница вашего дневника может выглядеть примерно так.

Когда ты не знаешь как оформить лд , то становится грустно. У всех красивые личные дневники, а у тебя как всегда… Но не стоит отчаиваться, мы поможем тебе советами по оформлению лд, а ты в свою очередь, выберешь те идеи, которые тебе понравятся.

Как оформить лд

Посмотри наши советы по оформлению и реши какие попробовать в дневнике. Начнем самого простого оформления – просто писать записи ручкой. Если тебе не хочется «заморачиваться», то эта самая легкая идея для тебя!

Второй совет оформления более сложный – рисовать маленькие рисуночки по теме твоей записи. Напиши чего хочется и нарисуй, то что хочется. Картинки для лд смотри по

Третья идея – стихи. Очень красивая идея, ведь читать стихи всегда интересно, независимо от их тематики.

Следующий совет – писать записи разноцветными гелевыми ручками или писать буквами разных размеров. Попробуй эту идею в своем дневнике, она тебе понравится, вот увидишь!

Еще советы – использовать кармашки, вклеивать распечатки или вырезки из журналов красоты и моды.

Но есть самый главный совет как оформить лд – всегда оформляйте аккуратно и красиво! Старайтесь вклеивать, писать и рисовать аккуратно, ведь любой личный дневник – это отражение его хозяйки.

Напоследок смотрите фото красиво оформленных личных дневников. Встретимся в другой записи про лд, которая находится

Идеи для оформления личного дневника

Определитесь с цветовой гаммой тетрадки и в соответствии с ней подберите необходимое количество листов. Это могут быть разноцветные листочки, радужное оформление из 7 цветов, пастельные тона, имитация залежалых листочков. Не избегайте и темной расцветки: на такие странички можно будет прикрепить конверты, наклейки, картинки или разделять ими периоды написания.
Страницы можно фигурно вырезать по краям, придать им интересную форму: кружева, закругленные уголки.
Выберите два листа для обложки (титульный и задний) и разместите их сверху и снизу стопки.
Возьмите дырокол и все странички пробейте так, чтобы на каждой было с левой стороны по два отверстия для сшивки страниц. Возьмите 2 колечка с учетом толщины ежедневника, проденьте их, чтобы соединить листы в готовый дневник.
При желании можно купить красивую тетрадь, продумать только ее внутренний дизайн.

мотивирующих цитат, мыслей;
планов и желаний на будущее;
достижений и жизненных неудач;
фиксирования важных событий, дат;
записей происходящего за день;
хороших воспоминаний;
полезных «напоминалок»;
фотографий;
вырезок из журналов и газет.

Что нарисовать

Как украсить личный дневник

В мире творчества есть масса идей для личного дневника своими руками – это оригами, скрапбукинг, аппликации:

Яркую аппликацию в ЛД можно выполнить из пуговиц, цветной бумаги, картона, ватных дисков, палочек, всяческих лент, блесток.
Вырезки из газет и журналов легко сделать в виде экрана телевизора или груза, который везут маленькие самолетики.
В технике оригами есть много вариаций: птички, цветы, бабочки, маленькие бантики, конвертики.

Видео

Практически все великие люди вели дневники, куда записывали свои мысли, переживания и наблюдения. Если вы хотите последовать их примеру и доверить чувства бумаге, то обязательно прочтите эту статью. В ней вы можете почерпнуть интересные идеи для личного дневника, а также научиться креативному оформлению и узнать способы ведения записей.

Кому и для чего нужен дневник?

Каждый человек нуждается в личном пространстве, куда не сможет войти без приглашения даже самый близкий человек. Дневник — это тот самый уголок, где каждый может без цензуры описывать свои чувства и тайные мысли. Подобные записи позволяют посмотреть на себя со стороны, оценить сложившееся положение вещей и сделать необходимые выводы. Недаром психологи и психотерапевты рекомендуют своим пациентам вести записи, а затем зачитывать их на сеансах.

Что уж говорить о подростках, на которых со всех сторон оказывают влияние взрослые. Родители, школьные учителя, репетиторы и тренеры требуют от молодых людей высоких результатов, отличных оценок и примерного поведения. Чтобы снять сильное психологическое напряжение, подросткам необходимо самовыражаться. И для этой цели как нельзя лучше подходит регулярное ведение записей с описанием своих чувств и переживаний.

Электронный дневник

Какие идеи для личного дневника особенно популярны у современных подростков? Конечно же, это электронные записи. Интернет-сайты, социальные сети и специализированные компьютерные программы соблазняют своих пользователей интересными предложениями о ведении личных заметок. Благодаря прогрессу каждый человек может оригинально оформить свою страницу, добавить фотографии и видео, 3D-обои, объемные фоновые рисунки и аудиовставки.

Неоспоримым плюсом данной формы ведения дневника является то, что прочитать его не сможет никто. Для этого вам необходимо всего лишь поставить на программу пароль. Если вы не являетесь опытным пользователем и боитесь, что не сможете установить достаточно сильную защиту, то лучше обратитесь к профильному специалисту. Теперь вы будете абсолютно спокойны за сохранность своих записей и сможете наслаждаться полной конфиденциальностью.

Однако при ведении электронных дневников существует и один большой минус — вы не можете подержать их в руках, полистать страницы или вдохнуть запах чернил.

Прочтите интересные идеи для личного дневника, которые мы опишем ниже и попробуйте воплотить их в жизнь. Представьте себе, как приятно вам будет через несколько лет прочесть свои детские записи и улыбнуться, вспоминая непростые школьные годы.

Как правило, мальчики стесняются заводить тетради или блокноты с пометкой «Личное». Они предпочитают выражать свои эмоции в более активных видах деятельности либо скрыться в дебрях Всемирной паутины. Зато каждая девочка хотя бы раз в жизни пробовала вести личные записи. Традиционно идеи для дневника можно разделить на следующие категории:

Идеи для оформления личного дневника

Запись своих мыслей с помощью ручек, карандашей, фломастеров и маркеров разного цвета.
Дополнение рукописного текста картинками, вырезанными из глянцевых журналов.
Описание произошедших событий с помощью небольших рисунков или комиксов собственного производства.
Создание тематических страниц. Например, можно выбрать тему «Планы на осень», «Чему я хочу научиться в этом году?» и дополнять их в любое время.
Зонирование листов разными красками: смешивайте оттенки и дополняйте их рисунками. На этом фоне записи будут смотреться особенно интересно и выразительно.
Изготовление кармашков для хранения милых сердцу вещей — записок, билетов в кино и фотографий.

Идеи для личного дневника можно придумывать каждый день. Для творческих личностей, мы уверены, это не составит никакого труда. Для тех, кто пока только начинает ориентироваться в море новых идей, мы советуем рассмотреть фотографии оригинальных страниц и черпать вдохновение в них.

Записывайте все мысли, которые вас посещают. Не стесняйтесь эмоций злости, обиды или зависти. Вылив эти неприятные чувства на страницы дневника, вы сможете расслабиться и переключиться на что-нибудь более приятное.
Постарайтесь не делать большие перерывы в записях: регулярность ведения поможет вам лучше оценить сложившуюся ситуацию.
Собирайте новые идеи для личного дневника: не стесняйтесь перенимать лучшее у своих подруг или друзей, а также искать вдохновение в Интернете.
Не будьте скучными: описывайте всю гамму своих эмоций, усиливайте их собственными рисунками и используйте самые разные средства выразительности.

Заключение

Как известно, личный дневник — это тайная и сокровенная часть души. Его нельзя держать на виду или показывать всем знакомым. Договоритесь с близкими о том, чтобы они не брали без разрешения вашу тетрадь и ни в коем случае не читали сделанные вами записи.

В случае если вы им не доверяете, устройте тайник и храните дневник в нем. Кроме того, вы можете придумать тайный шифр и вести записи с его помощью. Такой способ займет немного больше времени, но постепенно приобретет особую привлекательность.

Всегда свежие идеи;
Только легкие рисунки, картинки: по клеточкам для личного дневника;
Для девочек и мальчиков варианты;
И то, что порадует многих: лаконичные картинки для лд черно-белые.

За вами, наши дорогие посетители, выбор! Можно скачать и распечатать, а так же, срисовать разные рисунки.

Идеи для иллюстрирования своих записей

Только для вас! Вариант срисовывания по клеткам

Иллюстрации на разную тему

Черно-белые изображения

Оформление странички в личном дневнике. Классные идеи для ЛД: украшаем личный дневник вместе

Почти у каждого человека наступает период, когда он начинает вести личный дневник. Как это сделать, каждый решает сам. Но существует несколько общих рекомендаций, которые будут полезны новичку.

Для чего нужен личный дневник

Жанр «секретной тетрадки» остается востребованным с 10 века (в виде путевых и автобиографических заметок)до нынешних дней. Конечно, сегодня личный дневник выглядит совсем по-другому, вплоть до электронной версии.

Но причины появления дневника остаются прежними:

Не случайно чаще всего дневник начинают вести в подростковом возрасте, в период становления характера и мировоззрения.

С точки зрения психологии, ведение личного дневника является прекрасным способом сохранить и укрепить душевное равновесие, снизить уровень стресса, снять накопившееся за день напряжение.

Это признанный метод психотерапии, эффективность которого доказана практикой. Разнообразие дневников не поддается описанию.

Это может быть тонкая тетрадка, альбом для рисования, набор листов, блог в интернете – все зависит только от желания автора. То же самое относится к стилю оформления. Это может быть написанный молодежным сленгом, разукрашенный всеми цветами радуги, наполненный наклейками и прочими финтифлюшками дневник подростка.

А может быть аккуратный, с пронумерованными страницами, с календарем дневник взрослого педантичного человека. Требование одно – хозяину дневника должно быть комфортно.

Что пишут в ЛД

Дневник – портрет своего хозяина. И содержимое дневника отражает внутренний мир того, кто его ведет.

Что могут содержать странички дневника:

Хронология:

Анализ дня:

анализ случившихся событий;
обдумывание произошедшего, его оценка, личные эмоции;
интересные мысли, появившиеся в течение дня;
личные достижения;
мечты и планы на будущее.

Самообразование и самосовершенствование:

интересные цитаты;
любимые стихи и песни;
заметки о понравившихся книгах и фильмах;
впечатления от посещения спектаклей, выставок, экскурсий.

Увлечения, хобби:

кулинарные рецепты;
эскизы нарядов;
схемы для вязания;
советы по домоводству, садоводству, огородничеству;

Творчество:

свои стихи;
свои рисунки, эскизы;
вырезки из журналов, наклейки, открытки и т.п.

Памятки:

особенно памятные фотографии;
буклеты о выставках, экскурсиях;
интересные письма, романтические записки.

Для младших школьников, которые только собираются вести дневник, интересно и полезно будет начать его с описания членов семьи, друзей, увлечений, любимых игр, книг и фильмов и т.д.

Дневник из тетради

Существует много вариантов, как сделать личный дневник. Формат дневника каждый выбирает для себя сам. Тонкая тетрадь подойдет для редких эпизодических записей. Для постоянного ведения дневника лучше сразу приобрести толстую тетрадь, которой хватит для записей на долгий период. Чтобы дневник прослужил долго, лучше покупать качественную тетрадь с плотной бумагой.

Ее можно улучшить:

обложку дополнительно укрепляют, подклеив тканью или картоном. Для украшения можно добавить наклейки, рисунки, вышивку и т.п.;
для придания прочности тетрадь сшивают;
для удобства можно смастерить закладки;
записи можно дополнительно защитить. Для этого в страницах дыроколом пробивается сквозное отверстие, в которое продевают замочек.

Дневник из блокнота

Практичный вариант – дневник из блокнота. Лучше приобрести блокнот с большим количеством листов, скрепленных спиралью.

Чтобы придать оригинальность стандартному блокноту, можно:

Необычно оформить обложку, оклеив ее тканью или бумагой. Красивая аккуратная оклейка не только украсит обложку, но и придаст ей прочность. Можно дополнительно украсить обложку декоративными элементами;
Для дополнительной защиты можно проделать в блокноте сквозное отверстие через все страницы и продеть в него замочек;
Спираль можно заменить красивым шнурком, лентой, тесьмой. Но снимать спираль и продевать заменяющий ее шнур следует очень аккуратно.

Дневник из альбома

Для тех, кто будет заполнять личный дневник своими зарисовками, оптимально использовать альбом для рисования. Этот вариант больше подходит и любителям аппликаций, скрапбукинга и прочих творческих техник. Плотная бумага большого формата прекрасно подходит для рисования (тонкую тетрадную бумагу краски или фломастеры промочат насквозь) и работы с клеем.

При создании дневника из альбома для рисования можно:

укрепить и украсить обложку, аккуратно наклеив сверху слой ткани или плотной бумаги;
защитить записи продетым через альбомные листы замочком;
можно дополнительно сшить альбомные листы, чтобы они не распадались при большом количестве объемных аппликаций.

Дневник-папка

Можно не покупать готовую тетрадь или блокнот, а сделать оригинальный дневник-папку, используя разрозненные листы:

Дневник из офисной бумаги

Еще один способ создания дневника из отдельных листов – скрепление стопки офисной бумаги кольцами:

из плотной бумаги изготавливаются верхняя и нижняя обложки;
между обложками ровной стопкой сложить странички будущего дневника. Они могут быть разноцветными, красивой формы (например, с узорными краями или закругленными углами), различной плотности для разных разделов;
с левой стороны проделать дыроколом сверху и снизу по два сквозных отверстия, проходящих через всю стопку;
продеть в отверстия соединительные кольца.

Старая книга – оригинальная основа для ЛД

Творческая личность захочет иметь особенный личный дневник. Как сделать дневник креативным, подскажет старая, уже ненужная книга. Создание личного дневника на ее основе дает неограниченный простор фантазии и творчеству. Обложка украшается согласно вкусу хозяйки. Часть страниц можно удалить, можно склеить между собой, можно вклеить картинки и т.д.

А для того, чтобы вести записи, типографский шрифт придется закрасить, или замазать корректором, или заклеить тонкой бумагой. Словом, такой дневник потребует дополнительных усилий для решения возникающих проблем. Тем интереснее станет процесс его заполнения – как раз для неординарных натур.

Дневник с кожаной обложкой

Для дневников большого объема, которые будут долго использоваться, потребуется изготовить прочную обложку. Один из лучших вариантов – кожаная.

Для ее изготовления:

Плотную картонную основу обклеивают заготовкой из кожи. Кожаный лоскут должен быть больше, чем основа, чтобы припуски можно было загнуть и приклеить к внутренней стороне обложки. Используется стойкий клей типа «Момент»;
При приклеивании кожу необходимо хорошо разгладить и очень плотно прижать к основе;
Затем также плотно приклеиваются припуски с обратной стороны;
Для лучшего результата обложку помещают под пресс.

Дневник в интернете

Самый современный вариант личного дневника – электронная версия.

Возможны два варианта:

Изготовление обложки

Дневник начинается с обложки, которая должна привлекать и настраивать на позитив.

Что можно посоветовать по оформлению:

Оригами для обложки

Техника оригами незаменима при оформлении дневника – как обложки, так и внутренних страниц. Затейливо сложенные фигурки станут настоящей «изюминкой» дневника, нужно только выбрать подходящие варианты. Большие объемные фигурки не подойдут, но оригами предлагает много различных «плоских» поделок минимальной высоты: рамочки, силуэты, бантики, затейливые конверты.

Научиться складывать фигурки-оригами нетрудно, тем более что для дневника не нужны сверхсложные композиции – простой веер, вставленный между двумя страничками, выглядит очень эффектно.

Оформление первой страницы

Особого отношения заслуживает первая страничка. Для ее эстетического оформления можно использовать те же техники и правила, что и для обложки. А вот ее информационное наполнение следует продумать.

На первой страничке можно разместить:

Календарь в дневнике

Дневник подразумевает указание календарных данных каждой записи. Можно просто указывать число в начале записи, а можно ярко выделять дату, используя цветные чернила, особый шрифт и т.д.

Если для дневника предусмотрены функции ежедневника (план дел на каждый день, заметки-напоминалки, ежедневный анализ и т.п.), то удобно сразу отвести под ежедневник определенное количество страниц, создав «вложенный календарь». Например, отвести для каждого дня отдельную страничку.

Тогда можно заранее на каждой странице указать число, месяц, день недели.

Для удобства, странички можно оформить выступающими за пределы листа стикерами-закладками, на которых указана дата. Еще один вариант: вырезать странички «ступеньками» и указывать дату на них.

Внутреннее оформление страниц

Как оформлять внутренние страницы, чтобы сделать их интересными, решать только автору личного дневника. Важно, чтобы они вызывали положительные эмоции и желание заполнять их.

Несколько подсказок:

Конвертики, секретные карманы, хитрости в ЛД

Часто в дневниках хранят памятные вещи: билеты на мероприятия, буклеты, записки, маленькие сувениры, письма. Для этого удобно использовать особые кармашки и конверты. Кармашки для хранения памятных мелочей или секретной информации можно изготовить из особым образом сложенных или склеенных между собой страничек дневника. Также для этой цели можно использовать скотч.

Кармашки можно смастерить отдельно, а затем вклеить в дневник. Их делают из бумаги, ткани, фольги, пластика, а затем украшают– картинками, наклейками, узорами, стразами и т.д. Даже простой кармашек, изготовленный из сложенного пополам листа красивой бумаги, скрепленного по краям декоративным скотчем, будет смотреться красиво.

Конверты можно купить готовые, можно смастерить самостоятельно – например, в технике оригами.

Если в конверте будут храниться относительно объемные вещи (например, несколько фотографий), то его лучше прикрепить к плотной обложке. А вот кармашек для одной особенной записки или памятного сухого цветочка можно приклеить на страничку. Очень удобно и эстетично для крепления маленьких кармашков использовать декоративный скотч.

Украшение текста, узоры, окантовки по клеточкам

Для украшения текста используются разноцветные ручки и фломастеры. Для этой цели подойдет и необычное расположение записей – например, в несколько колонок, или блоками в разных местах страницы. Можно разнообразить странички красивым орнаментом по краям листа, разнообразными рамками, как нарисованными, так и наклеенными. Для создания подобной окантовки очень удобно использовать шаблоны.

С их помощью даже те, кто не умеет рисовать, могут очень красиво оформить лист дневника. Еще одна прекрасная возможность для тех, кто не очень хорошо рисует – рисование по клеточкам. Достаточно найти понравившийся рисунок и по клеточкам перенести его в свой дневник. В интернете легко найти целые подборки подобных рисунков.

Картинки для ЛД

Украсить дневник можно при помощи готовых рисунков. Это могут быть картинки из журналов – например, фотографии любимого певца или артиста. Продаются целые наборы тематических наклеек (котиков, принцесс и пр.), которые красиво смотрятся в тексте.

Понравившуюся картинку можно найти в интернет и распечатать на цветном принтере. Подойдут и красивые фантики от конфет, поздравительные открытки, марки и т.д.

Надписи и вырезки из журналов в дневнике

В глянцевых журналах можно найти не только картинки, но и интересные цитаты, высказывания, красивые заголовки. Их также можно использовать для оформления дневника. Если обвести такие вырезки рамочкой или выделить другим способом, они сразу привлекут к себе внимание.

Последняя страница

Страницу, завершающую личный дневник, как и первую, тоже можно сделать особенной. Может быть, на ней будут собраны мысли, которые особенно поразили владельца дневника. Или планы на будущее. А можно просто нарисовать дверь, ведущую в «прекрасное далеко».

Конверт для ЛД

Можно дополнительно защитить дневник – и от износа, и от лишнего внимания. Для этого мастерят дополнительный конверт-чехол для хранения личного дневника. Для создания простого конверта берется лист бумаги и складывается втрое так, чтобы в большую часть помещался дневник, а меньшая оставшаяся часть будет клапаном для конверта. Боковые сгибы скрепляются клеем или скотчем.

Красивая бумага и декоративный скотч сделают такой конверт нарядным даже без дополнительных украшений.

Можно изготовить чехол из ткани по такому же принципу. Клапан легко сделать застегивающимся на пуговицу или на «липучку».

Дневник – это очень личное дело. И каждый сам решает, как его вести.

Личный дневник способен стать настоящим другом, помогающим понять, как строить свою жизнь, как сделать ее гармоничной и наполненной. Это уникальная возможность вспомнить свое прошлое и оценить его, уже повзрослев.

Видео: как сделать личный дневник

Как сделать личный дневник из тетради, смотрите в видео-ролике:

Как оформить личный дневник, смотрите в видео:

Всегда свежие идеи;
Только легкие рисунки, картинки: по клеточкам для личного дневника;
Для девочек и мальчиков варианты;
И то, что порадует многих: лаконичные картинки для лд черно-белые.

За вами, наши дорогие посетители, выбор! Можно скачать и распечатать, а так же, срисовать разные рисунки.

Идеи для иллюстрирования своих записей

Только для вас! Вариант срисовывания по клеткам

Иллюстрации на разную тему

Черно-белые изображения

Как оформить личный дневник – вопрос, который волнует очень многих. И не просто оформить, а сделать свой личный дневник одним из самых красивых и оригинальных. Можно придерживаться какого-то одного стиля оформления, а можно наполнять его множеством разнообразных идей. Какие же идеи для лд выбрать?

Как оформить личный дневник

Сначала поговорим об обложке вашего дневника. Нужно помнить, что обложка – это лицо вашего личного дневника. Она должна быть аккуратной! Украсьте обложку оберточной бумагой, или сделайте ее в джинсовом стиле. Можно украсить обложку бисером или яркими красивыми пуговицами.

Также очень важно сделать красивой и оригинальной первую страницу личного дневника. Здесь можно вклеить вашу фотографию (как аватарка в социальной сети). Можно нарисовать какой-то большой красивый рисунок – приглашение посетить дневник.

Как оформить личный дневник внутри

Как оформить личный дневник внутри? Можно сделать множество разнообразных интересных страниц.

Страницы идеи для лд :

страница о любимом фильме;
страница любимой музыки;
страница сладостей;
страница секретов;
страница желаний;
страница мечты;
страница love is…
страница дружбы или страница о лучшей подруге;
страница любимых стихов;
страница моды;
страница твоих увлечений.

И много — много других интересных страниц! Все зависит только от вашей фантазии!

Еще идеи для личного дневника

Из художественных материалов для оформления личного лд подойдет абсолютно все! И не забывай о красивом почерке! Если красиво написано – читать всегда приятно!

Хотите посмотреть фото красивых личных дневников? Тогда идите по этой

(сокращенно лд) очень нужный предмет для любого возраста. Он помогает упорядочить мысли, а через несколько лет его так интересно перечитывать. Я поделюсь в этой статье новыми идеями для личного дневника. Мы научимся его оформлять, поймем, зачем он нужен и что туда писать.

Зачем нужен личный дневник?

Вторая причина идеи для личного дневника – новая. Возможно, девочка любит писать, поэтому такой дневник пригодится для тренировки в письме.

Третья причина заключается в том, чтобы описывать не только особенные моменты жизни или записать всё, что придёт в голову, а фиксировать свой день. Вечером, когда ты находишься дома или уже перед тем как лечь спать, спокойно, не торопясь, обдумай день в письменной форме.

Личный дневник идеи для оформления

Сейчас я расскажу о лд личном дневнике и идеях его оформления. Все девочки, и я в том числе, хотят красиво вести тетрадки, блокноты. Дневник не является исключением.

Украсить тайную книжечку можно большим количеством способов. Наклейки, цветные ручки, ленточки, картинки или фотографии – всё это и многое другое может быть умещено в дневнике. Не обязательно оставлять его серым и скучным.

Если в лд начать рисовать или писать какие-то мысли конкретной ручкой, то можно сделать шифр, который разгадает только та девочка, которая ведёт этот дневник. Например, синей записывать события, которые произошли в школе, зелёной – на прогулках, коричневой – дома. Или оттолкнуться от эмоций: красная ручка – приятные события, синяя – нейтральные, то есть те, которые были и были (никак не повлияли), а чёрная – те, которые вызвали грустное настроение.

Также сюда можно помещать цитаты или выдержки из книг. Например, прочитала я книгу и мне понравилась фраза какая-то. Вот, чтобы её не потерять, я записываю в лд и выясняю, почему именно эта цитата мне так нравится.

Не забывай убирать свой дневник после того как зафиксируешь мысли и прятать ключик так, чтобы ты могла его найти в любой момент, а остальные – нет.

Новые идеи оформления личного дневника — ЛД

Как оформить личный дневник внутри для девочек

Лет так двадцать назад, личный дневник вели в общей тетради. И для украшения использовались разноцветные ручки, вырезали из журналов красочные иллюстрации, а также фантики от жевательных резинок и приклеивали их в дневник. Ну и конечно же рисовали от руки. Таким образом придавали своему верному другу красоту. Сейчас же все конечно иначе. И так, я предлагаю Вам рассмотреть следующие варианты по оформлению личного дневника внутри своими руками.

Ещё довольно-таки красиво смотрится оформление Ваших событий в виде маленьких изображений. Таким образом Вы делаете для себя пометочки, которые хотите запомнить. Такие же не большие иллюстрации в личном дневнике можно применять для определённой тематике.

Очень красиво смотрится оформление личного дневника в виде разных форм карточек сделанных из цветной бумаги либо картона. На карточках пишут свои мысли, цитаты, события и т.п.

Можно склеить два листовка вместе и разукрасить листок акварельными красками. Размазывайте, ляпайте, брызгайте, рисуйте! В общем включайте фантазию и творите!

Придайте красоту своему верному другу используя простой и цветные карандаши, гелиевые цветные ручки и плюсом ко всему этому ещё и вырезки из журналов, газет, книг и т.п.

Для записи в дневник небольших событий, пометок и т.п. Можно писать разноцветными пастами большими буквами в разных наклонах и направлениях.

Пофантазируйте и придумайте красивые кармашки. Приклейте или прикрепите их. В них очень удобно хранить мелкие вещи. К примеру: маленькие фотки.

Ну вот с оформлением личного дневника внутри разобрались! Это лишь были некоторые примеры, на самом деле как украсить личный дневник это конечно же сугубо личное дело каждой девушки. Фантазируйте и у Вас все получится. А теперь разберёмся с оформлением личного дневника снаружи, т.е его обложки.

Как оформить обложку личного дневника

Если Вы ещё не ведете личный дневник, а только собираетесь, то можно подобрать либо тетрадь с красивой иллюстрацией под Ваш вкус. Но, а если уже дневник ведётся вовсю и у Вас возникло желание изменить либо раскрасить его обложку, то надеюсь Вам помогут пару не хитрых советов.

Что можно нарисовать в личном дневнике

Интересно вести лд личный дневник, правда? Делиться впечатлениями, уже произошедшими событиями, записывать переживания и мечты. Даже просто порисовать в нем, когда есть минутка. Твой любимый ЛД никогда не предаст, всегда выслушает и сохранит сокровенные тайны.

Содержание

Лд личный дневник
Идеи для личного дневника для девочек. Картинки для срисовки, оформление легко и красиво, рисунки по клеточкам
Для чего нужен личный дневник?
Идеи по созданию личного дневника своими руками
Как украсить личный дневник
Видео про личный дневник

Лд личный дневник

В оформлении личного дневника важна аккуратность, как внешне, так и внутри. Согласись, всегда приятно брать в руки красиво оформленный ЛД. Любую, даже самую невзрачную тетрадку можно превратить в красивый личный дневник. Нужно будет, конечно же, потрудиться, но результат того стоит. Существует много идей обложки, нужно только аккуратно все сделать. Кстати, идеи оформления ты можешь найти на нашем сайте — посмотри рубрику «Личный дневник».

На первой странице как правило пишут информацию о хозяйке дневника. Она может быть оформлена как угодно, но главное – попробуй сделать первую страницу интересной и немножечко с загадкой. Кстати, обязательно напиши свой адрес электронной почты, ведь если вдруг лд личный дневник потеряется, нашедшему будет легко найти тебя и вернуть ЛД.

Когда внешний вид и первая страница готовы – дальше можно писать об интересах, хобби, любимых фильмах и героях, вкусняшках, любимой музыке, рисовать и вклеивать фотографии распечатки или вырезки из журналов – писать обо всем, что вам интересно, полная свобода действий!

Более подробно об идеях ищи в рубрике «Личный дневник», а пока смотри отличные идеи для оформления — стихи для лд или распечатки для личного дневника.

Идеи для личного дневника для девочек. Картинки для срисовки, оформление легко и красиво, рисунки по клеточкам

Подростки школьного возраста, как правило, обладают богатой фантазией. Поэтому очень здорово в это время заняться творчеством. Самая популярная вещь, которую можно сделать своими руками легко и красиво, — это личный дневник. Для этого необходимо лишь свободное время и оригинальные идеи.

Для чего нужен личный дневник?

Личный дневник является не только определенным видом развлечения для девочки, но и своеобразным помощником.

Вот лишь несколько идей, для чего его можно вести:

отмечать заметки и дела, которые нужно сделать;
записывать свои секреты и тайны;
организовать анкету для близких и друзей;
вклеивать наклейки и различные аппликации;
писать небольшие статьи о своих кумирах;
сделать сборник логических задач и головоломок для подруг и друзей;
рисовать оригинальные зарисовки;
поместить внутрь дневника сонник;
описывать гадания и интересные ритуалы;
собрать коллаж из своих желаний;
посвятить дневник моде, собирая в нем актуальные образы;
учить иностранный язык с помощью дневника: включить в него самодельный словарь.

Идеи для личного дневника (легко и красиво оформить можно самостоятельно) здорово сочетать одну с другой.

Идеи по созданию личного дневника своими руками

Идея сделать личный дневник собственными руками — полезное и увлекательное занятие, помогающее развить воображение и фантазию и создать своё собственное творение легко и красиво. Есть несколько удачных вариантов, которые можно взять за основу этой поделки.

Для этого потребуются некоторые инструменты, которые приведены в таблице:

Часть /раздел дневника	Что потребуется
Основа	Тетрадь, блокнот, альбом
Обложка	Картон, цветная бумага, клей, декоративный скотч, фломастеры, цветные ручки, линейка, тесьма, цветные ленты
Страницы (оформление)	Ручки, карандаши, бумага для оригами, клей, наклейки, рисунки, вырезки из газет, степлер, фломастеры, маркеры
Заключительная страница	Клей, вырезки из журналов, цветные карандаши, ручки, фломастеры

Первым шагом к созданию личного дневника является выбор основы. Вариантов может быть несколько, ниже они рассмотрены.

Дневник из тетради в клеточку

Классический способ создания дневника предполагает превращение обычной тетради в клеточку в уникальное творение. Если записи будут вестись 1 раз в неделю, 12 или 24 листа вполне достаточно. Но для ежедневных заметок целесообразно взять общую тетрадь в 80 или 96 листов.

Возможностей здесь намного больше, такие как:

публиковать новости и личные мысли;
собирать в единый канал любимые музыкальные композиции и делиться ими с друзьями;
подписываться на других блогеров и читать их новости;
выкладывать картинки или собственные фото;
набирать количество подписчиков, тем самым увеличивая свою популярность;
находить друзей и единомышленников в различных уголках планеты.

Как украсить личный дневник

Определившись с основой дневника, можно переходить к следующему шагу — оформлению его дизайна.

Идеи для личного дневника (легко и красиво можно оформить и обложку, и каждую страницу) включают в себя множество вариантов украшений. Каждый сможет выбрать для себя тот дизайн, который близок темпераменту и вкусу. Начинают оформление с обложки.

Изготовление обложки

Обложка является визитной карточкой дневника, и ее стиль полностью зависит от фантазии владелицы.

цветная бумага и картон;
краски, карандаши и маркеры;
декоративный скотч;
наклейки, аппликации;
вырезки из журналов;
блестки, пайетки и стразы;
разноцветные ленты, тесьма, кружево.

В сети есть множество схем для создания различных предметов с помощью техники оригами.

Этот вид искусства предполагает складывание фигур из бумаги без ножниц и клея.

Если девочка имеет именно такое хобби, его обязательно нужно использовать в создании личного дневника.

Для обложки есть несколько вариантов:

украсить объёмной фигурой центр обложки;
оформить угол или несколько сложёнными конвертами;
сложить рамку из бумаги и вставить туда собственное фото.

Оригами для обложки — идея оригинальная, но не очень практичная. Выпуклое украшение может легко помяться или потерять свою форму, поэтому для дневника с частым пользованием целесообразно выбрать нейтральный вариант украшения.

Закончив с обложкой, продолжают оформление дневника, переходя к 1 странице.

Оформление первой страницы

1 страница обычно содержит личные данные владелицы, такие как:

фамилию, имя и отчество;
адрес проживания;
номер мобильного телефона;
адрес электронной почты;
некоторые медицинские данные (группа крови, резус фактор).

Идеи для лд как это сделать. Интересные вещи для личного дневника. Как сделать личный дневник, фото. Рецепты и любимая еда

Для многих девушек личный дневник – настоящее сокровище. В нем заключены все тайны, мечты и желания. Любая девушка хочет сделать свой личный дневник лучшим, а для этого нужны идеи. В этой статье лд идеи для личного дневника мы собрали для вас несколько идей оформления страниц личного дневника.

Ld идеи для личного дневника

Начните оформлять свой лд с обложки — закройте лицевую сторону дневника. Советуем сшить красивый тканевый чехол, либо аккуратно обклеить чехол красивыми картинками из журналов.

Далее идет первая страница файла. На первой странице многие пишут о себе, выкладывают свое фото. Некоторые люди публикуют свои данные, такие как имя, номер телефона и адрес электронной почты. Зачем? А если ты потеряешь свой дневник… как тебя потом найти?

Кстати, если вы не хотите, чтобы ваш дневник читали посторонние люди, они ставят «ЧИТАТЬ ЗАПРЕЩЕНО» на первой странице! Или придумывают всякие другие «отпугиватели».

Если вы не хотите, чтобы кто-то вообще мог открыть ваш дневник без вашего ведома, подумайте о покупке мягкой тетради.

Ld идеи для личного дневника: как вести и оформлять

Какие есть идеи для личного дневника и что можно в нем написать или нарисовать? Ответ прост — как душе угодно! Ведь это твой лд! Украсьте и украсьте именно так, как вам нравится.

Как сделать личный дневник внутри для девочки

Лет двадцать назад в общей тетради велся личный дневник. А для украшения использовали разноцветные ручки, вырезали красочные иллюстрации из журналов, а также фантики от жвачки и вклеивали в дневник. И, конечно же, рисовали от руки. Так они подарили красоту своему верному другу. Сейчас, конечно, все иначе. И так, предлагаю вам рассмотреть следующие варианты изготовления личного дневника внутри своими руками.

Оформление ваших мероприятий в виде небольших изображений тоже выглядит довольно симпатично. Таким образом, вы делаете для себя заметки, которые хотите запомнить. Такие же небольшие иллюстрации в личном дневнике можно использовать для определенной темы.

Очень красиво смотрится оформление личного дневника в виде различных форм карточек из цветной бумаги или картона. Они пишут на карточках свои мысли, цитаты, события и т.д.

Можно склеить два листочка и раскрасить листочек акварельными красками. Размазывай, размазывай, брызгай, рисуй! В общем, включайте фантазию и творите!

Подарите своему верному другу красоту с помощью простых и цветных карандашей, гелиевых цветных ручек и, помимо всего этого, еще и вырезок из журналов, газет, книг и т.д.

Для записи мелких событий в дневник, заметок и т.д. Можно писать разноцветными пастами крупными буквами под разным наклоном и направлением.

Фантазируй и придумывай красивые кармашки. Приклейте или прикрепите их. В них очень удобно хранить мелкие вещи. Например: маленькие картинки.

Ну вот, с дизайном личного дневника внутри мы разобрались! Это были лишь некоторые примеры, на самом деле, как украсить личный дневник – это, конечно же, сугубо личное дело каждой девушки. Представьте, и у вас все получится. Теперь разберемся с оформлением личного дневника снаружи, то есть его обложки.

Как оформить обложку для личного дневника

Если вы еще не ведете личный дневник, а только собираетесь, то можете подобрать либо блокнот с красивой иллюстрацией на ваш вкус. Но, а если дневник уже в самом разгаре и у вас есть желание изменить или покрасить его обложку, то, надеюсь, вам поможет парочка не хитрых советов.

Почти все великие люди вели дневники, куда записывали свои мысли, переживания и наблюдения. Если вы хотите последовать их примеру и доверить свои чувства бумаге, то обязательно прочитайте эту статью. В нем вы сможете почерпнуть интересные идеи для личного дневника, а также узнать о креативном дизайне и научиться вести записи.

Кому нужен дневник и зачем?

Каждому человеку необходимо личное пространство, куда без приглашения не может войти даже самый близкий человек. Дневник – это тот самый уголок, где каждый без цензуры может описать свои чувства и тайные мысли. Такие записи позволяют взглянуть на себя со стороны, оценить текущее положение дел и сделать необходимые выводы. Недаром психологи и психотерапевты рекомендуют своим пациентам вести записи, а затем зачитывать их во время сеансов.

Что уж говорить о подростках, на которых со всех сторон влияют взрослые. Родители, школьные учителя, воспитатели и тренеры требуют от молодежи высоких результатов, отличных оценок и примерного поведения. Для снятия сильного психологического напряжения подросткам необходимо самовыражаться. И для этой цели как нельзя лучше подходит регулярная запись своих чувств и переживаний.

Электронный дневник

Какие идеи для личных дневников особенно популярны у современных подростков? Конечно же, это электронные записи. Веб-сайты, социальные сети и специализированные компьютерные программы завлекают своих пользователей интересными предложениями для личных заметок. Благодаря прогрессу каждый человек может оригинально оформить свою страницу, добавить фото и видео, 3D-обои, объемные фоны и аудиовставки.

Неоспоримым преимуществом этой формы ведения дневника является то, что никто не может его прочитать. Для этого нужно просто поставить пароль на программу. Если вы неопытный пользователь и опасаетесь, что не сможете установить достаточно сильную защиту, то лучше обратиться к профильному специалисту. Теперь вы будете абсолютно уверены в сохранности ваших записей и сможете наслаждаться полной конфиденциальностью.

Однако есть один большой недостаток при ведении электронных дневников – их нельзя держать в руках, листать страницы или вдыхать запах чернил.

Прочтите интересные идеи для ведения личного дневника, которые мы описываем ниже, и попытайтесь воплотить их в жизнь. Представьте, как вам будет приятно через несколько лет читать свои детские записи и улыбаться, вспоминая трудные школьные годы.

Как правило, мальчики стесняются иметь тетради или блокноты с пометкой «Личные». Они предпочитают выражать свои эмоции в более активной деятельности или прятаться в дебрях всемирной паутины. Но каждая девушка хотя бы раз в жизни пыталась вести личные рекорды. Традиционно дневниковые идеи можно разделить на следующие категории:

Идеи для оформления личного дневника

Записывайте свои мысли ручками, карандашами, фломастерами и фломастерами разных цветов.
Дополнение рукописного текста картинками, вырезанными из глянцевых журналов.
Описание происходивших событий с использованием небольших рисунков или комиксов собственного производства.
Создание тематических страниц. Например, можно выбрать тему «Планы на осень», «Чему я хочу научиться в этом году?» и дополнять их в любое время.
Зонирующие листы разных цветов: смешивайте оттенки и дополняйте их рисунками. На этом фоне записи будут выглядеть особенно интересно и выразительно.
Изготовление кармашков для хранения дорогих сердцу вещей — записок, билетов в кино и фотографий.

Идеи для личного дневника можно придумывать каждый день. Для творческих людей, мы уверены, это не составит труда. Для тех, кто только начинает ориентироваться в море новых идей, советуем рассмотреть фотографии оригинальных страниц и черпать в них вдохновение.

Записывайте все мысли, которые приходят к вам. Не стесняйтесь эмоций гнева, обиды или зависти. Выливая эти неприятные ощущения на страницы своего дневника, вы сможете расслабиться и переключиться на что-то более приятное.
Старайтесь не делать больших перерывов в своих заметках: регулярность поможет вам лучше оценить ситуацию.
Собирайте новые идеи для своего личного дневника: не стесняйтесь учиться у своих подруг или друзей и ищите вдохновение в Интернете.
Не будь скучным: описывай весь спектр своих эмоций, дополняй их собственными рисунками и используй разнообразные средства выражения.

Заключение

Как известно, личный дневник – это сокровенная и сокровенная часть души. Его нельзя держать на виду или показывать всем знакомым. Договоритесь с близкими, чтобы они не брали вашу тетрадь без разрешения и ни в коем случае не читали сделанные вами записи.

На случай, если вы им не доверяете, устройте тайник и ведите в нем дневник. Кроме того, вы можете придумать секретный шифр и вести с ним записи. Этот способ займет немного больше времени, но постепенно станет более привлекательным.

Всем привет! Это вторая часть цикла статей о идеях для личных дневников … Этот выпуск имеет следующее содержание:

Также вспоминаем, что есть в других выпусках по этой теме:

— варианты оформления первой страницы, 50 идей для тематических страниц и как самому сделать пароль на дневник!
— готовые блокноты с кодовым замком
Картинки для ЛД — большая подборка рисунков для дневника

Идеи для личного дневника и КАК оформить личный дневник

Картинки для личного дневника

Ни один дневник не обходится без картинок и рисунков! Вот интересные варианты оформления страниц ЛД с картинками:

Хорошо нарисованная девочка на зимней странице:

Несколько рисунков — девочка, Эйфелева башня, торт

Еще не нарисованный рисунок для личного дневника:

Вот еще видео о рисовании в LD:

Идеи: рисунки по клеточкам для личного дневника

Рисунки по клеточкам — отличный способ использовать четкую геометрию блокнотов и блокнотов в коробке! Рисовать по клеточкам очень удобно и легко, вот пара примеров таких рисунков:

Пандочка

Идеи для личного дневника — картинки: Зеленый человечек на странице

Если вас интересуют такие рисунки — здесь это целая подборка рисунков по клеточкам для примера, там вы точно найдете что-то что можно нарисовать в личном дневнике :

Как сделать личный дневник ? Вот несколько хороших идей:

Наклейки и наклейки

Видео о том, что такое наклейки и стикеры:

Вырезки из журналов

Еще один супер-пупер вариант как красиво вести личный дневник вырезки из глянцевых журналов. Они очень красиво смотрятся на страницах LD! Вот несколько примеров:

Идеи для личного дневника: Фото вырезки (тыква хэллоуин)

Как украсить личный дневник: надписи

Очень важно сделать красивые заголовки и надписи на страницах:

Личный дневник — украшение внутри: оформление текста

Вариантов довольно много для приятного и красивого оформления текста вот несколько примеров:

Фон закрашивается карандашом

Выделение текста цветными маркерами:

Личный дневник — оформление текст :

Текст пишется отдельными столбиками разноцветными ручками:

Личный дневник — как украсить ЛД узорами, окантовкой, орнаментом

Эти узоры очень красиво смотрятся на страницах:

Широкий вариант узора:

Видео о том, как рисовать выкройки:

Что можно сделать в личном дневнике — Конверты, потайные кармашки и хитрости:

Каждый дневник должен содержать небольшой конверт для «секрета», подарков и прочего.

Карманный пример:

Вот схема как сделать карман:

А вот видео как сделать карманный конверт для личного дневника:

Идеи личного дневника: ДНЕВНИК и как вести Личный дневник

Иногда возникает вопрос — а что можно написать в личный дневник ? Помимо различных тематических страниц, не забывайте о почти главном предназначении дневника — дневнике!

Как им управлять? Очень простой!

Обязательно отведите небольшую часть тетради для своего дневника — но не менее 30 страниц (по одной на каждый день). И лучше всего рассчитывать дневник на несколько месяцев, тогда нужно будет оставить около 100 страниц. Далее на каждой странице напишите число и день недели.

Что писать в дневнике? Обычно туда записывают расписание дня — например, уроки в школе, важные события дня, различные напоминания и, конечно же, мысли. В конце дня просто сядьте и подведите итоги всего, что произошло, запишите, кто и что вам больше всего понравилось, а что нет. Это очень важно — не нужно держать эмоции в себе!

Личный дневник — идеи: запись в дневник To do list — список дел, которые нужно сделать за день.

Вот примеры списка дел других авторов:

И дневник, видео:

Идеи для личного дневника: Как сделать личный дневник и что для этого нужно

Как сделать личный дневник?

Вариант 1: Купить специальный дневник. Но у этого пути есть большой недостаток — обычно такие дневники либо очень детские, либо наоборот — очень серьезные и деловитые

Вариант: 2 Использование толстого блокнота для ЛД — очень хороший и недорогой вариант!

Идеи для личного дневника — что нужно для его ведения?

Вот полный список:

Блокнот (это может быть толстая тетрадь, специальная тетрадь или дневник)
Ручки — обычные синие и цветные — гелевые, масляные
Карандаши общие и цветные
Фламастеры хорошего цвета
Маркеры — толстые маркеры для выделения текста
Ножницы — для вырезания альбомов, изготовления самодельных конвертов
Вырезки — для этого тоже нужно иметь журналы, но думаю у всех есть
Наклейки — для выделения важной информации, заметок
Наклейки — очень красивое украшение
Клей (для приклеивания вырезок и других элементов)
Линейка (для рисования прямых линий там, где это необходимо)
Листы белой и цветной бумаги (для изготовления конвертов, кармашков и других прикольных вещей
Закладки (очень полезная вещь)

В детстве и юности у многих был личный дневник, в котором излагалось самое дорогое и сокровенное. Такое нельзя доверять даже самым близким людям. Очень часто для дневника использовались обычные тетради или блокноты. Сегодня можно купить уже готовый вариант со стандартным декором, но это не сравнится с украшением, сделанным своими руками. Ниже приведены несколько примеров украшения дневника своими руками.

Как украсить личный дневник тканью

Хорошее украшение получится из ткани ярких цветов, приятной на ощупь. Вам понадобится несколько полосок яркой ткани, ножницы и иголка.

1) Измерить стороны дневника, вырезать полоски, равные одной трети ширины обложки дневника и длину, равную ширине дневника. Прибавьте по 2 см с каждой стороны на швы. Сшейте три детали, чтобы получилось цельное полотно. Боковой шов сделать зигзагом.

2) Сложите обложку дневника так, чтобы правый и левый края были загнуты внутрь. Внизу и вверху у вас получатся кармашки, в которые нужно будет вложить обложку дневника и пришить. Место сшивания можно отметить булавками, чтобы не ошибиться в расчетах.

3) Сшейте верхний и нижний край чехла, подогните его на 1-2 см и выверните на лицевую сторону. Обложка готова.

Кожаный чехол

Стильный чехол можно сделать из кожи или кожзама. Также вам понадобятся декоративные металлические шипы, ножницы, клеевой пистолет и дырокол.

1) Поместите дневник на кусок кожи, обведите его и прибавьте по 4 см с каждой стороны. Деталь вырезается.

2) На передней части крышки сделать отверстия на равном расстоянии друг от друга дыроколом, вставить в них металлические шипы.

3) Осталось вставить дневник в обложку, смазать края клеем и подвернуть, дождаться высыхания клея. Готовый.

Дневник для девочки

Подарком для маленькой принцессы может стать ежедневник, украшенный конвертиками для хранения записей, шнурками или миниатюрным замочком. Дневник также можно украсить бумажными аппликациями, штампами, стразами, бисером, лентами и кружевом.

Другие варианты украшения дневника хорошо показаны на видео:

Есть много идей как украсить личный дневник внутри, например :

1) Украшением может быть картинка, иллюстрирующая написанное. Или это может быть фотография.

2) Регистрация произошедших событий в виде небольших схематических рисунков.

3) Написание текста буквами разной формы и размера, в разные стороны. Так можно расписать любые факты, например, о себе.

4) Кармашки на страницах для дорогих сердцу вещей (заметок, билетов, небольших фотографий).

5) Вы можете не только записывать мысли и события, но и украшать их фотографиями, картинками, памятными вещами.

6) Придумайте интересную подпись, поставьте ее в конце каждой записи.

7) Используйте яркие ручки и карандаши, чтобы дневник не выглядел скучно.

8) Наклейки — хороший способ украсить.

10) Раскрасьте страницы дневника акварелью: размазывайте и распыляйте. Напишите текст сверху. Если страницы тонкие, приклеивайте их по две за раз, чтобы получилось аккуратно.

11) Личный дневник можно сделать не из блокнота или блокнота, а из старой ненужной книги. В книге желательно вырвать каждую третью страницу, чтобы она не была слишком объемной. Далее раскрашиваем страницы гуашью, вклеиваем чистые листы для заметок, а также различные картинки и фотографии.

Таким образом, вы можете украсить дневник не только снаружи, но и внутри.

Украшение страниц блокнота очень простой процесс, для этого достаточно пофантазировать и придумать интересные элементы.

Видео по теме

Вспомогательные технологии для детей с ограниченными возможностями обучения: обзор

Вспомогательные технологии (АТ) помогают людям с различными видами инвалидности — от когнитивных проблем до физических нарушений. В этой статье основное внимание будет уделено AT для людей с ограниченными возможностями обучения (LD).

Использование технологий для улучшения обучения является эффективным подходом для многих детей. Кроме того, учащиеся с LD часто добиваются большего успеха, когда им разрешают использовать свои способности (сильные стороны) для преодоления своих недостатков (проблем). Инструменты AT сочетают в себе лучшее из обеих этих практик.

Эта статья познакомит родителей с ролью AT в помощи их детям с LD. Чем лучше вы осведомлены об АТ, тем больше шансов, что ваш ребенок добьется успеха в школе, на отдыхе и, в конечном счете, на работе. Вы также захотите узнать, как выбрать надежные инструменты AT и выбрать технологию, адаптированную к индивидуальным потребностям, способностям и опыту вашего ребенка.

Что такое вспомогательные технологии для LD?

AT для детей с LD определяется как любое устройство, часть оборудования или система, которая помогает обойти, обойти или компенсировать специфические недостатки обучения человека. За последнее десятилетие в ряде исследований была продемонстрирована эффективность АТ у лиц с БЛ. ¹ АТ не излечивает и не устраняет трудности в обучении, но может помочь вашему ребенку раскрыть свой потенциал, поскольку позволяет ему использовать свои сильные стороны и обходить трудности. Например, учащемуся, который испытывает трудности с чтением, но имеет хорошие навыки слушания, может быть полезно слушать аудиокниги.

Как правило, AT компенсирует дефицит навыков учащегося или область(и) инвалидности. Тем не менее, использование AT не означает, что ребенок не может также получать коррекционные инструкции, направленные на устранение дефицита (например, программное обеспечение, предназначенное для улучшения плохих звуковых навыков). Студент может использовать программное обеспечение для коррекционного чтения, а также слушать аудиокниги. На самом деле, исследования показали, что AT может улучшить некоторые дефициты навыков (например, чтение и правописание). ^2,3

АТ может повысить уверенность ребенка в себе и чувство независимости. Дети, которые испытывают трудности в школе, часто чрезмерно зависят от помощи родителей, братьев и сестер, друзей и учителей в выполнении заданий. Используя AT, дети могут добиться успеха в самостоятельной работе.

Какие проблемы с обучением решают вспомогательные технологии?

AT может решить многие проблемы с обучением. Учащийся, у которого есть трудности с письмом, может составить школьный отчет, надиктовав его и преобразовав в текст с помощью специального программного обеспечения. Ребенок, у которого проблемы с математикой, может использовать ручной калькулятор для подсчета очков во время игры с другом. А подростку с дислексией может быть полезен AT, который будет читать вслух онлайн-учебник своего работодателя. Существуют инструменты AT, которые помогут учащимся, которые борются с:

Аудирование

Некоторые инструменты вспомогательных технологий (AT) могут помочь людям, которые испытывают трудности с обработкой и запоминанием разговорной речи. Такие устройства можно использовать в различных условиях (например, на лекции в классе или на встрече с несколькими спикерами).

Математика

Инструменты вспомогательных технологий (AT) для математики разработаны, чтобы помочь людям, которые борются с вычислениями, организацией, выравниванием и копированием математических задач на бумаге. С помощью визуальной и/или звуковой поддержки пользователи могут лучше ставить и решать основные математические задачи.

Организация и память

Инструменты вспомогательных технологий (AT) могут помочь человеку планировать, организовывать и отслеживать свой календарь, расписание, список задач, контактную информацию и различные заметки. Эти инструменты позволяют ему управлять, хранить и извлекать такую информацию с помощью специального программного обеспечения и портативных устройств.

Чтение

Существует широкий спектр вспомогательных технологий (AT), доступных для помощи людям, которые борются с чтением. Хотя каждый тип инструмента работает немного по-своему, все эти инструменты помогают, представляя текст как речь. Эти инструменты помогают облегчить декодирование, беглость чтения и понимание.

Письмо

Существует широкий спектр инструментов вспомогательных технологий (АТ), которые помогут учащимся, испытывающим трудности с письмом. Некоторые из этих инструментов помогают учащимся обойти реальную физическую задачу письма, в то время как другие способствуют правильной орфографии, пунктуации, грамматике, использованию слов и организации.

Какие виды вспомогательных технологий доступны?

Термин «ассистивные технологии» обычно применяется к компьютерному оборудованию, программному обеспечению и электронным устройствам. Тем не менее, многие инструменты AT теперь доступны в Интернете. Инструменты AT, которые поддерживают детей с LD, включают:

Расширители аббревиатур

Используемые при обработке текстов, эти программы позволяют пользователю создавать, сохранять и повторно использовать сокращения для часто используемых слов или фраз. Это может сэкономить пользователю нажатия клавиш и обеспечить правильное написание слов и фраз, которые он закодировал как сокращения.

Альтернативные клавиатуры

Эти программируемые клавиатуры имеют специальные накладки, которые настраивают внешний вид и функции стандартной клавиатуры. Учащимся, у которых есть трудности с вводом текста или проблемы с набором текста, может помочь индивидуальная настройка, которая сокращает количество вариантов ввода, группирует клавиши по цвету/расположению и добавляет графику для облегчения понимания.

Аудиокниги и публикации

Записанные книги позволяют пользователям слушать текст и доступны в различных форматах, таких как аудиокассеты, компакт-диски и загрузки в формате MP3. Специальные блоки воспроизведения позволяют пользователям искать и делать закладки на страницах и главах. Услуги подписки предлагают обширные коллекции электронных библиотек.

Электронные математические рабочие листы

Электронные математические рабочие листы — это программы, которые могут помочь пользователю организовать, упорядочить и решить математические задачи на экране компьютера. Цифры, которые появляются на экране, также могут быть прочитаны вслух с помощью синтезатора речи. Это может быть полезно для людей, которым трудно совмещать математические задачи с карандашом и бумагой.

Программное обеспечение базы данных Freeform

Этот инструмент, используемый в сочетании с текстовым процессором или другим программным обеспечением, позволяет пользователю создавать и хранить электронные заметки, «записывая» соответствующую информацию любой длины и по любому вопросу. Позже он может получить информацию, набрав любой фрагмент исходной заметки.

Графические органайзеры и программы для структурирования

Графические органайзеры и программы для структурирования помогают пользователям, у которых возникают проблемы с организацией и структурированием информации, когда они начинают писать проект. Этот тип программы позволяет пользователю «сбрасывать» информацию в неструктурированном виде, а затем помогает ему организовать информацию в соответствующие категории и порядок.

Менеджеры информации/данных

Этот тип инструмента помогает человеку планировать, организовывать, хранить и извлекать свой календарь, список задач, контактные данные и другую информацию в электронной форме. Менеджеры персональных данных могут быть портативными, портативными устройствами, компьютерным программным обеспечением или комбинацией этих инструментов, работающих вместе путем «обмена» данными.

Оптическое распознавание символов

Эта технология позволяет пользователю сканировать печатный материал в компьютер или портативное устройство. Отсканированный текст затем читается вслух с помощью системы синтеза речи/чтения с экрана. Оптическое распознавание символов (OCR) доступно в виде автономных устройств, компьютерного программного обеспечения и портативных карманных устройств.

Персональные системы прослушивания FM

Персональные системы прослушивания FM передают голос говорящего прямо в ухо пользователя. Это может помочь слушателю сосредоточиться на том, что говорит говорящий. Устройство состоит из беспроводного передатчика (с микрофоном), который носит говорящий, и приемника (с наушниками), который носит слушатель.

Портативные текстовые процессоры

Портативный текстовый процессор — это легкое устройство, которое легко транспортировать (например, из класса в дом). Это может быть полезно для детей, которым трудно писать от руки и которые предпочитают пользоваться клавиатурой. Обработка текстов позволяет пользователю редактировать и исправлять свою письменную работу более эффективно, чем вручную.

Программы корректуры

Учащимся, у которых возникают проблемы с письмом (например, с орфографией, грамматикой, пунктуацией, употреблением слов и структурой предложений), могут помочь программы (входящие во многие системы обработки текстов), которые сканируют текстовые документы и предупреждают пользователя о необходимости возможные ошибки.

Программы распознавания речи

Программа распознавания речи работает совместно с текстовым процессором. Пользователь «диктует» в микрофон, и произнесенные им слова появляются на экране компьютера в виде текста. Это может помочь пользователю, чьи способности к устной речи лучше, чем его навыки письма.

Синтезаторы речи/программы чтения с экрана

Эти системы могут отображать и читать вслух текст на экране компьютера, включая текст, который был введен пользователем, отсканирован с печатных страниц (например, книг, писем) или текст, появляющийся на экране компьютера. Интернет.

Говорящие калькуляторы

Говорящий калькулятор имеет встроенный синтезатор речи, который считывает вслух каждую цифру, символ или операционную клавишу, которую нажимает пользователь; это также озвучивает ответ на проблему. Эта слуховая обратная связь может помочь ему проверить точность нажатия клавиш и проверить ответ, прежде чем он перенесет его на бумагу.

Говорящие программы проверки орфографии и электронные словари

Говорящие программы проверки орфографии и электронные словари могут помочь плохому орфографу выбрать или идентифицировать подходящие слова и исправить орфографические ошибки в процессе письма и корректуры. Говорящие устройства «читают вслух» и отображают выбранные слова на экране, чтобы пользователь мог их видеть и слышать.

Магнитофоны с переменной скоростью

Магнитофоны/проигрыватели позволяют пользователю прослушивать предварительно записанный текст или записывать устную информацию (например, лекцию в классе) и воспроизводить ее позже. Магнитофоны с регулируемой скоростью (VSC) ускоряют или замедляют скорость воспроизведения без искажения голоса «говорящего».

Программы для предсказания слов

Программное обеспечение для предсказания слов может помочь пользователю во время обработки текстов, «предсказывая» слово, которое пользователь намеревается ввести. Прогнозы основаны на правописании, синтаксисе и частом/недавнем использовании. Это побуждает детей, которым трудно писать, использовать правильную орфографию, грамматику и выбор слов с меньшим количеством нажатий клавиш.

Профиль вашего ребенка

Вот несколько факторов, которые следует учитывать при выборе продуктов AT для вашего ребенка:

Каковы его конкретные потребности и проблемы? В каких областях академических навыков она борется?
Каковы ее сильные стороны? AT должен использовать способности вашего ребенка, чтобы компенсировать его инвалидность.
Каковы ее интересы, навыки и опыт использования технологий? В каких условиях и ситуациях она будет использовать инструмент АТ? AT может помочь ребенку с LD лучше функционировать в школе, а также в других условиях, таких как дома, на работе, общественных мероприятиях и развлекательных мероприятиях.

Другие технологические инструменты для обучения

Существуют и другие формы технологий, предназначенные для того, чтобы помочь всем учащимся, в том числе с LD, улучшить свою академическую успеваемость. Эти технологии несколько отличаются от АТ, но заслуживают упоминания.

Учебное программное обеспечение используется для обучения конкретным академическим навыкам (например, чтению и письму) или предметному содержанию (например, истории и естественным наукам). Он отличается от AT тем, что дает инструкции, а не обходит области сложности.

Универсальный дизайн для обучения (UDL) — это философия, охватывающая модели, методы и продукты обучения для улучшения образовательного опыта разных учащихся (независимо от того, имеют ли они трудности в обучении или нет). При таком подходе AT часто встраивается в учебные материалы и может быть адаптирована, чтобы помочь учащимся с ограниченными возможностями добиться успеха в общей учебной программе.

Макрофотографии (снимки крупным планом) отлично смотрятся даже на телефоне с помощью этих профессиональных приемов

«Макросъемка» — это съемка объекта с очень крупного плана, чтобы на итоговом изображении он выглядел в натуральную величину или больше. . Фотографии крупным планом популярны, особенно для съемки природы, потому что они могут запечатлеть детали насекомых, цветов и многого другого с невероятной четкостью. И вы можете добиться этого эффекта даже с помощью камеры вашего телефона. Использование макрообъектива практически с любой камерой телефона, например iPhone 11, iPhone 11 Pro, Galaxy S10 Plus или Pixel 4 (249 долларов США).на Amazon), позволяет вам приблизиться, запечатлеть невероятные детали и увидеть ту сторону природы, о существовании которой вы даже не подозревали.

С помощью макросъемки даже крошечные объекты, такие как садовые насекомые или лепестки цветов, могут выглядеть огромными на экране или при печати, и вы будете поражены тем, насколько по-другому выглядят такие обыденные вещи, если смотреть на них с такого близкого расстояния.

Лучше всего то, что вам не нужно много оборудования и вам не придется покидать свой задний двор, чтобы начать.

Эндрю Хойл/CNET

Обратите внимание: хотя я использую Galaxy S10 Plus для съемки изображений, которые вы видите в этой статье, большинство этих советов применимы к любому телефону, независимо от того, снимаете ли вы на Android или iPhone.

1. Приобретите макрообъектив для своего телефона

Единственное, что вам нужно добавить к телефону, чтобы делать макроснимки, — это макрообъектив. Я использую макрообъектив Moment, который крепится к специальному чехлу для телефона Moment. Линзы Moment дорогие, но они сделаны из высококачественного стекла и являются одними из лучших по качеству. Чехлы подходят для телефонов Galaxy S8 (180 долларов на eBay) и новее, iPhone 6 и новее, OnePlus 6, 6T и 7 Pro, а также Google Pixels.

Макрообъектив Moment дает прекрасные результаты.

Эндрю Хойл/CNET

Вы также можете найти макрообъективы с клипсами от таких компаний, как Olloclip (система клипс Olloclip позволяет прикреплять объективы практически к любому телефону). На Амазоне есть множество вариантов по гораздо меньшей цене, хотя я не могу говорить о качестве.

2. Найдите свой объект: лучше всего подходят насекомые и цветы

Крайне важно найти объект, который хорошо смотрится в макро. Очевидно, вам нужно мыслить мелко. Очень маленький.

Мир природы полон возможностей — просто введите в Google слово «макросъемка», и в результатах поиска преобладают изображения насекомых и растений. Самое замечательное в том, что пытаться найти такого рода дикую природу для фотографирования не означает прыгать на самолете в отдаленный природный заповедник.

Ваш сад или близлежащий парк, скорее всего, изобилуют предметами. Но найти его может быть сложнее. Мой совет — обращайте внимание на небольшие участки растений или кустов, высматривая любых мини-зверей, которые могут цепляться за стебли или прятаться под листьями. Это может занять много времени, но как только вы поймете, как их найти и где они, скорее всего, будут, все станет проще.

Найти этого крошечного паучка было легко — он пришел ко мне!

Эндрю Хойл/CNET

Помните, что это их дом. Поэтому не ломайте растения и не срывайте листья только для того, чтобы получить более качественные кадры. Получение классной фотографии не является оправданием для уничтожения среды обитания.

Если насекомые вас не интересуют, просканируйте интересные цветы, листья, камни, распущенные перья или другие природные объекты, которые вблизи могут выглядеть совершенно иначе. Даже текстуры на одежде, еде или коже могут выглядеть интересно при увеличении на изображении.

Это не обязательно должны быть насекомые — следите за любыми интересными мелкими деталями, из которых можно сделать отличный макроснимок.

Эндрю Хойл/CNET

3. Снимайте в ручном режиме

Я почти всегда снимаю в ручном режиме на своем телефоне, когда делаю художественные снимки, потому что у меня гораздо больше контроля над тем, как выглядит готовое изображение. Я также слежу за тем, чтобы снимать в необработанном формате, что дает мне больший контроль над балансом белого и цветами после того, как я сделаю снимок и начну редактировать.

В большинстве телефонов Android, включая последний Galaxy S10 Plus, вы найдете режим Pro (ручной) в качестве опции в стандартном приложении камеры. Пользователям iPhone понадобится такое приложение, как Moment, которое дает вам ручное управление настройками, а также позволяет снимать в необработанном формате. Я также предпочитаю использовать ручную фокусировку, о которой я расскажу позже, и удостоверяюсь, что у меня установлена выдержка не менее 1/125, чтобы свести к минимуму размытие от рук.

4. Используйте серийную съемку

Когда я не снимаю в ручном режиме, я иногда снимаю в стандартном режиме камеры. Основная причина в том, что он позволяет мне использовать режим серийной съемки, который делает несколько снимков в быстрой последовательности, просто нажав и удерживая кнопку спуска затвора. Если насекомое находится в неудобном положении или двигается, я обнаружил, что лучший способ сделать хороший снимок — держать палец на кнопке спуска затвора и делать десятки фотографий в секунду.

Ветер двигал жука на этом листе то в фокусе, то не в фокусе, но, снимая в режиме серийной съемки, я смог продолжить стрельбу и впоследствии выбрать лучший снимок.

Эндрю Хойл/CNET

Делая это, я примерно держу объект в поле зрения, слегка перемещая объектив вперед и назад. Надеюсь, одно из 70 или около того изображений будет красивым и четким.

Большинство ручных режимов не позволяют использовать пакетный режим. В качестве обходного пути в ручном режиме я как можно быстрее нажимаю на кнопку спуска затвора, чтобы сделать больше изображений, тем самым увеличивая шансы, что хотя бы одно из них будет выглядеть хорошо. С помощью этого метода я могу сделать до 30 отдельных изображений каждого объекта, и, возможно, только одно из них будет хорошим. Это техника удачи или промаха, но удары стоят затраченных усилий!

5. Правильно сфокусируйтесь даже без наложения фокуса

Обеспечение фокусировки на объекте — самая сложная часть всей задачи. Профессиональные макрофотографы часто используют технику, называемую наложением фокуса, при которой несколько изображений в разных точках фокусировки объединяются в постобработке для получения полностью сфокусированного объекта. Этого трудно добиться в полевых условиях, так как требуется, чтобы объект оставался совершенно неподвижным во время съемки. Вот почему, к сожалению, некоторые макрофотографы используют в своей работе мертвых насекомых или тех, которых хранили в холодильнике, чтобы замедлить их движения, а затем снимать в контролируемой студии.

Макрообъектив «Момент», который я использую, дает блестящий крупный план насекомого, но он также имеет чрезвычайно узкую плоскость фокусировки, а это означает, что только тонкая полоска сцены является резкой. Например, фокусировка на глазе насекомого, скорее всего, приведет к тому, что его тело потеряет фокус. Хотя это означает, что сложно получить четкий снимок, ваш фон также будет привлекательно размытым, и вам не нужно так сильно беспокоиться о отвлекающих элементах позади вашего объекта.

Навести фокус на глаз этой мухи было непросто.

Эндрю Хойл/CNET

Техника, которую я чаще всего использовал для этой части, включала съемку в ручном режиме S10 Plus с ручной фокусировкой, установленной на ближайшую точку фокусировки. После этого я неуклонно двигал камеру к объекту до тех пор, пока в фокусе не оказалась та часть, которую я хотел сделать резкой, а затем я сделал снимок. На таком уровне увеличения даже малейшее сотрясение приведет к тому, что все будет расфокусировано, поэтому требуется твердая рука.

6. Добавьте дополнительное освещение

Как и в любой другой фотографии, макросъемка зависит от яркого света, падающего на объект. Но получить это освещение в нужных местах сложно. Я сделал много макроснимков под полуденным солнцем, так как яркий свет помог подчеркнуть цвета насекомых. Это также позволило телефону использовать самую низкую возможную чувствительность ISO (что привело к меньшему шуму изображения) и самую короткую скорость затвора (для более четких изображений).

Но попытка найти крошечных насекомых в листве означает, что вы вполне можете охотиться под кустами или в лесных районах, где естественного света может быть недостаточно. Другая проблема заключается в том, что вы можете блокировать солнечный свет своим телефоном, так как вам нужно будет подойти очень близко к объекту, а лучший угол может включать отбрасывание тени.

Когда окружающее освещение слишком сильно упало, я использовал светодиод RotoLight, чтобы сделать объект ярче.

Эндрю Хойл/CNET

В последнем вопросе можно было бы помочь, просто попробовав разные ракурсы, но я также добился больших успехов, применив свое собственное освещение. Я использую кольцевой светодиодный фонарь RotoLight Stealth, который работает на батарейках и легко помещается в рюкзак. Он достаточно мощный, чтобы добавить достаточное количество света на ваш объект, а его портативный размер означает, что вы можете легко перемещать его, чтобы направить свет под наиболее удачным углом. Я также использую более новый Rotolight Neo II, который имеет гораздо более высокую светоотдачу, что делает его лучше для освещения макрообъектов при дневном свете.

7. Эффектное редактирование

Редактирование изображения — это отличный способ сделать простой снимок и превратить его в произведение искусства. Я использую Adobe Lightroom на Android для редактирования своих снимков, но я также работаю с Snapseed и VSCO.

Обычно я настраиваю баланс белого, чтобы получить естественный и точный цвет (это еще проще, если вы снимали в RAW). Затем я играю с экспозицией, чтобы убедиться, что блики не слишком яркие и что детали не теряются в темных тенях.

Изображение до (слева) и после (справа) редактирования в Adobe Lightroom на Galaxy S10 Plus. Простая обрезка, баланс экспозиции и некоторое выборочное осветление на лету действительно сделали это изображение популярным.

Эндрю Хойл/CNET

Затем я редактирую исключительно то, что, на мой взгляд, выглядит хорошо. Я могу использовать корректирующую кисть, чтобы «нарисовать» больше света на объекте, чтобы помочь ему выделиться, и использовать виньетку, чтобы затемнить края кадра, тем самым привлекая внимание к объекту в середине. При работе с природой и дикой природой я хочу убедиться, что я сохраняю объект как можно более естественным — мне нравится улучшают сцену, но не изменяют ее — поэтому я избегаю резкого изменения цветов или использования сильных фильтров.

Нет правильного или неправильного способа редактирования, поэтому расслабьтесь с чашкой чая и наслаждайтесь настройкой этих ползунков, чтобы увидеть, чего вы можете достичь с помощью только что сделанного набора захватывающих макрофотографий.

Сейчас играет: Смотри: iPhone XS Max против Galaxy S10 Plus: Камеры сражаются…

8:35

Galaxy S10 Plus против iPhone XS Max: образцы фотографий из нашего сравнения

+19 еще Посмотреть все фото

Image3C, мультимодальный интегративный метод, основанный на изображениях и не зависящий от меток, для анализа отдельных клеток

Реферат

Классификация клеток на основе изображений стала распространенным инструментом для выявления фенотипических изменений в клеточных популяциях. Однако эта методология ограничена организмами, обладающими хорошо охарактеризованными видоспецифичными реагентами (9).0003 напр. , антитела), которые обеспечивают идентификацию клеток, их кластеризацию и обучение сверточной нейронной сети (CNN). В отсутствие таких реагентов возможности классификации на основе изображений оставались недоступными для многих исследовательских организмов. Мы разработали методологию классификации на основе изображений, которую мы назвали Image3C (классификация клеток с помощью изображений и цитометрии), которая не требует реагентов, специфичных для определенного вида, или ранее существовавших знаний об образце. Image3C сочетает в себе проточную цитометрию на основе изображений с беспристрастным, высокопроизводительным конвейером кластеризации клеток и интеграцией CNN. Image3C использует внутренние клеточные особенности и невидоспецифические красители для выполнения 9 задач.0003 de novo анализ состава клеток и обнаружение изменений между различными условиями. Таким образом, Image3C расширяет использование анализа состава клеточной популяции на основе изображений для исследования организмов, в которых неизвестны подробные клеточные фенотипы или для которых недоступны видоспецифичные реагенты.

Дайджест eLife

Клетки являются строительными блоками всех живых организмов. Они бывают разных типов, у каждого своя роль. Понимание состава клеток, т. е. , сколько клеток и какие типы клеток присутствуют внутри органа, может указывать на то, что делает этот орган. Он также может показать, как этот орган изменяется в различных условиях, например, во время инфекции или лечения.

Самые мощные методы изучения клеток хорошо работают для видов, о которых исследователи уже много знают, таких как мыши, рыбки данио или люди, но не для менее изученных животных. Чтобы изменить это, Accorsi, Box, Peuß et al. создал новый инструмент под названием Image3C для изучения состава клеток менее изученных организмов.

Вместо использования реагентов, которые работают только для определенных видов, инструмент использует молекулы, которые работают для многих видов, например красители, окрашивающие клеточное ядро. Машина для сортировки клеток, известная как проточный цитометр, подключенная к микроскопу, затем каждую секунду делает снимки сотен окрашенных клеток, а Image3C группирует их на основе их внешнего вида без необходимости каких-либо предварительных знаний о типах клеток. Аккорси и др. затем протестировали Image3C на клетках иммунной системы рыбок данио, хорошо изученного животного, и яблочных улиток, малоизученного животного. Для обоих видов инструмент смог сортировать клетки по группам, представляющим разные части иммунной системы.

Image3C ускоряет процесс группировки и снижает необходимость вмешательства пользователя и времени. Это снижает риск систематической ошибки по сравнению с ручным подсчетом клеток. Он может сортировать клетки даже тогда, когда неизвестны типы клеток в организме и даже когда не существует специализированных реагентов для организма. Это означает, что он может характеризовать клеточный состав новых тканей, происходящих от организмов, никогда ранее не изученных. Доступ к этому неизведанному миру клеток открывает ранее недоступные подсказки о том, как органы ведут себя и развиваются, и позволяет исследователям исследовать влияние изменений окружающей среды на эти клетки.

Введение

Анализ одиночных клеток имеет решающее значение для нашего понимания фундаментальных биологических процессов, таких как развитие, гомеостаз, регенерация, старение и болезни (Golam et al., 2016; Kimmel et al., 2019; Pepe-Mooney et al., 2019). ; Филиппеос и др., 2018; Тирош и др., 2016). Для высокопроизводительного анализа этих и других биологических процессов с разрешением одной клетки требуются технологии, способные описывать отдельные клетки и впоследствии объединять их в кластеры на основе сходства таких признаков, как морфология, экспрессия белков клеточной поверхности или профиль транскриптома. Недавние достижения в области профилирования клеток на основе изображений и секвенирования РНК одиночных клеток (scRNA-seq) позволяют проводить количественную оценку различий между популяциями клеток и сравнивать состав типов клеток между образцами (Caicedo et al. , 2017). Одноклеточные исследования с использованием традиционных исследовательских организмов ( напр. , мыши, крысы или плодовые мушки) выигрывают от наличия геномных платформ и установленных библиотек антител. Однако этого нельзя сказать о растущем числе важных, но недостаточно изученных исследовательских организмов, которым не хватает таких реагентов и чье биологическое исследование могло бы принести огромную пользу от анализа одиночных клеток. В этих случаях для идентификации и характеристики конкретных клеток часто используют классические гистохимические методы. Тем не менее, успешной идентификации и подсчету биологически значимых типов клеток в таких исследованиях может помешать как ограниченное количество, так и разнообразие клеточных атрибутов (мало признаков или низкий динамический диапазон), доступных для определения типов клеток, а также предвзятость наблюдателя при использовании традиционных, подходы к ручному счету ( напр. , гемоцитометр и окраска по Гимзе) (van der Meer et al. , 2004). Эти недостатки, наряду с отсутствием обширных знаний о клеточно-специфических фенотипах, доступных для обучения или для априорных предположений, обычно приводят к недооценке сложности клеточного состава или взаимодействий между типами клеток в тканях.

Автоматическая классификация клеток с использованием сверточных нейронных сетей (CNN, метод машинного обучения [ML], специализирующийся на распознавании и классификации изображений) стала многообещающим подходом для точного высокопроизводительного анализа клеток, свободного от предвзятости наблюдателя (Blasi et al., 2016 г.; Эйленберг и др., 2017 г.; Кобаяши и др., 2017 г.; Лей и др., 2018 г.; Нассар и др., 2019 г.; Судзуки и др., 2019). На сегодняшний день автоматизированные методы кластеризации и классификации на основе CNN требуют наличия ранее существовавших знаний об интересующем организме или типе клеток (, например, , клеточно-специфические морфологические признаки в наборе изображений) или наличии клеточно-специфических реагентов (, например, , антитела) или геномной последовательности (, например, , секвенирование отдельных клеток) (в таблице 1 представлен обзор существующих методов) (Baron et al. , 2019; Blasi et al., 2016; Cheng et al., 2021 ; Эйленберг и др., 2017 г.; Хенниг и др., 2017 г.; Кобаяши и др., 2017 г.; Лей и др., 2018 г.; Нассар и др., 2019 г.). Это означает, что для эффективного использования подходов искусственного интеллекта (ИИ) для анализа отдельных клеток необходимо иметь доступную информацию для обучения алгоритма или моделей машинного обучения, которая часто возникает в виде информации, полученной при использовании таких реагентов, как антитела. . Области исследований, которые полагаются на межвидовые сравнения или исследования новых исследовательских организмов, выиграют от анализа на основе одной клетки, который не требует ранее существовавших знаний о типах клеток ( т.е. , что требуется, например, для обучения CNN) и/или наличие антител или молекулярных баз данных. Например, в междисциплинарной области экоиммунологии все большее число исследователей изучают адаптацию иммунной системы к различным условиям путем изучения состава иммунных клеток у различных животных (Maizels and Nussey, 2013). Учитывая влияние состава иммунных клеток на ответ иммунной системы организма (Kaczorowski et al., 2017), применение современного анализа одиночных клеток в экоиммунологических исследованиях существенно расширило бы наши знания о пластичности и сохранении иммунных ответов в организме. разнообразие различных животных и условий (Peuß et al., 2020).

Подробный обзор инструментов кластеризации ячеек без меток, включая сравнение их основных функций.

Название инструмента	Был протестирован на нескольких типах клеток?	Требуется априорное знание образца и/или видоспецифичных реагентов для кластеризации?	Использует имеющиеся в продаже аппаратные средства?	Использует бесплатное программное обеспечение или программное обеспечение с открытым исходным кодом?
Image3C (настоящая работа)	ДА (цельный мозг почки рыбки данио; гемолимфа яблочной улитки)	НЕТ Не требует предварительных знаний или видоспецифичных реагентов для кластеризации изображений клеток и обучения нейронной сети. Если они доступны, их можно использовать/интегрировать.	ДА (ImageStream)	ДА (IDEAS; Vortex; R; Python) НЕТ (FCS Express Plus)
CellProfiler ^*	ДА (фиксированные клетки Jurkat; живые клетки Jurkat; делящиеся дрожжи; лейкоциты человека)	ДА Требуются аннотированные наборы данных для обучения алгоритмов машинного обучения либо путем окрашивания образцов известными маркерами, либо путем ручной кластеризации клетки.	YES (ImageStream; Microscope)	YES (IDEAS; CellProfiler) NO (MATLAB)
CellProfiler Analyst ^†	NO (Jurkat cells)	ДА Требует использования флуоресцентных маркеров для аннотирования клеток и использования их в качестве основы для обучения алгоритмов машинного обучения.	Да, (ImageStream)	Да (идеи; CellProfiler/ Phyton)
СПАСИОТРЕВАЯ МАРКИ. использовать в качестве наземной истины и для обучения нескольких моделей глубокого обучения. 9	ДА (Глубокие нейронные сети)
Оптофлюидная временная микроскопия растяжения линия, MCF-7)	ДА Не обеспечивает кластеризацию клеток и анализ разрешения отдельных клеток. Изменения анализируются в целом по образцу без привязки его к типу клеток.	NO (Оптофлюидный временной микроскоп и микрофлюидные устройства)	НЕТ (MATLAB)
Рамановское рассеяние ^¶	ДА (клетки микроводорослей; циркулирующие опухолевые клетки в крови человека)	ДА клетки Требуются гомогенные культуры. После различных обработок эти образцы используются для создания баз данных для обучения моделей глубокого обучения.	НЕТ (Высокоскоростной многоцветный микроскоп стимулированного комбинационного рассеяния (ВКР) и микрожидкостная платформа)	ДА (Глубокое обучение, структура нейронной сети, VGG-16)
Визуализация продолжительности флуоресценции ^**	НЕТ (лейкоциты человека)	ДА Зависит от других методов идентификации типов клеток для сравнения их сигналов автофлуоресценции и затухания флуоресценции для дальнейшего анализа.	ДА (флуоресцентная микроскопия; FLIM; флоуцитометр)	ДА (Python)

* Блази и др., 2016; Нассар и др., 2019 г..
† Хенниг и др., 2017 г.
‡ Ченг и др., 2021.
§ Кобаяши и др., 2017.
¶ Судзуки и др., 2019.
** Якимов и др., 2019.

Чтобы сделать сложный анализ клеточного состава доступным для любого исследовательского организма без необходимости наличия ранее существовавших знаний о клеточных популяциях или видоспецифических реагентов, мы разработали классификацию клеток методом цитометрии с помощью изображений (Image3C). Этот метод анализирует, визуализирует и количественно оценивает высокопроизводительным и беспристрастным образом состав клеточных популяций с использованием морфологических признаков клеток и невидоспецифических флуоресцентных зондов (9). 0003 напр. , окрашивание ядер или красители для метаболических состояний, которые хорошо функционируют в различных организмах) (рис. 1, табл. 1). Используя морфологию клеток и/или флуоресцентные красители, связанные с функцией или метаболическим состоянием, Image3C может анализировать суспензии одиночных клеток, полученные в результате любого экспериментального дизайна, кластерных клеток de novo , присутствующих в интересующем образце, и сравнивать их количество между собой или среди разных анализов. Как только получена кластеризация de novo , основанная на внутренних функциях клетки, Image3C использует CNN, которая использует эти кластеры в качестве обучающих наборов, избегая таким образом предвзятости пользователя или ручной классификации (рис. 1, таблица 1). Это создает «машину» классификатора клеток на основе CNN, используемую для количественной оценки полученных впоследствии данных проточной цитометрии на основе изображений и сравнения клеточного состава образцов в нескольких экспериментах с высокой пропускной способностью без необходимости повторения трудоемких шагов для de novo кластеризация. Сочетание изображений сгруппированных клеток, результатов их функциональных анализов и опубликованной литературы о близкородственных организмах может позволить идентифицировать и описать интересующие типы клеток. По сравнению с существующими методами кластеризации клеток без меток, Image3C не требует начального окрашивания антителами (Cheng et al., 2021; Hennig et al., 2017; Lippeveld et al., 2020; Nassar et al., 2019), предварительно существующие знания о специфической морфологии клеток (Suzuki et al., 2019; Yakimov et al., 2019), и не ограничивается конкретным клеточным фенотипом (Blasi et al., 2016) для априорной идентификации определенных типов клеток (табл. 1). Это делает Image3C чрезвычайно универсальным и применимым практически к любому исследовательскому организму и ткани, из которых можно получить диссоциированные отдельные клетки. Параллельно с этим подходом к кластеризации de novo , Image3C может использовать реагенты для конкретных видов и предшествующие знания, которые можно объединить с набором транскриптомных данных и предоставить новый и дополнительный уровень информации, основанный на морфологии и функциях клеток. Таким образом, Image3C сочетает в себе современный высокопроизводительный сбор данных с помощью проточной цитометрии на основе изображений, расширенный и беспристрастный кластерный анализ, статистику для сравнения клеточных составов в разных образцах и компонент классификатора CNN для простого определения изменений в составе клеток в нескольких экспериментах.

Схематическое изображение рабочего процесса Image3C, метода кластеризации клеток на основе морфологических признаков.

( A ) Суспензию отдельных клеток готовят для анализа методом проточной цитометрии на основе изображений. Клетки могут быть помечены любым реагентом, подходящим для интересующих видов. Сигнал может выделять определенные компоненты ячейки (, например, , ядра), метаболические состояния клеток или специфические функции клеток. Образцы обрабатываются на ImageStream ^X Mark II, и для каждого образца сохраняются 10 000 зародышевых и сфокусированных событий в виде отдельных необработанных изображений. ( B ) Программное обеспечение IDEAS используется для открытия необработанных изображений, компенсации для коррекции распространения флуоресценции, вычитания фона и количественного определения значений внутренних морфологических и флуоресцентных признаков. R (или R studio) используется для расчета корреляции между функциями, чтобы позволить обрезать функции, которые являются избыточными по отношению к другим. Образцы, которые являются выбросами среди повторов, также удаляются до окончательной нормализации интенсивности флуоресценции. ( C ) Изображения сгруппированы на основе значений морфологических и флуоресцентных признаков и визуализированы в виде графика силовой направленной компоновки (FDL), где каждая точка представляет одно событие. ( D ) Интеграция R в программное обеспечение FCS Express Plus позволяет визуализировать изображения клеток по кластерам или специально выбранным с помощью ворот. Этот шаг позволяет оценить морфологическую однородность кластеров, определить, подходит ли количество кластеров, и исследовать фенотип/функции клеток на основе визуализации отдельных каналов. ( E ) Корреляционный график Спирмена значений признаков по кластерам является одним из вариантов, доступных в Image3C для построения интегрированных данных. Эта тепловая карта показывает сходства и различия между ячейками, принадлежащими к разным кластерам. ( F ) Если проводятся новые эксперименты и необходимо проанализировать новые данные, можно использовать два подхода. (1) Если целью является сравнение образцов, принадлежащих к одному и тому же эксперименту (, например, , обработка и контроль), шаги, описанные до сих пор ( A ) до ( E ) можно повторно применить к новому набору данных, включая статистический анализ для сравнения относительной численности кластеров. Этот подход создаст новый набор кластеров, которые необходимо будет повторно аннотировать. Сравнение наборов кластеров, полученных в результате нескольких экспериментов и нескольких раундов анализа, может быть сложной задачей без предварительного знания о типах клеток, явно различающихся морфологиях или биомаркерах, которые позволили бы установить уникальную корреляцию между кластерами, полученными из разных графиков FDL. (2) Если целью является объединение экспериментов и сравнение количества типов клеток между ними, использование шагов ( F ) и ( G ). Классификатор CNN обучается с использованием изображений, полученных из клеток гомеостаза, наивных клеток или клеток дикого типа (WT), и уже беспристрастно организованных в кластеры с помощью первой части нашего метода. Это создаст обученный классификатор с классами CNN на основе кластеров FDL. ( G ) Затем этот классификатор используется для деконволюции данных из новых экспериментальных наборов и отнесения каждого события к классу CNN с заданной вероятностью. Это обеспечивает высокопроизводительный и беспристрастный способ сравнения различных наборов экспериментов без необходимости наличия ранее существовавших знаний о типах клеток тканей, клеточных биомаркерах или необходимости перекрестного аннотирования кластеров, что увеличивает вероятность внесения ошибок. Полная схема конвейера и пошаговая техническая информация, такая как используемое программное обеспечение, время, необходимое для обработки, и формат экспортируемого файла, представлены на интерактивной карте. .

Результаты и обсуждение

Image3C

Image3C — это инструмент для визуализации, разработанный для изучения состава ткани с разрешением одной клетки в исследовательских организмах, для которых недоступны антитела и ранее существовавшие данные о типах клеток (рис. 1, таблица 1). Image3C позволяет проводить высокопроизводительный и беспристрастный анализ в сценариях, где ручной подсчет и идентификация клеток на основе наблюдателя в настоящее время являются единственными вариантами. Image3C включает в себя все компоненты, необходимые для компенсации захваченных изображений, количественной оценки нескольких признаков для каждого события, кластеризации событий, визуализации и изучения данных, а также обучения и использования CNN для анализа последующих образцов и интеграции нескольких экспериментов (рис. 1, рис. 1 — рис. дополнение 1).

После приготовления суспензии отдельных клеток из интересующего организма клетки окрашивают комбинацией красителей, действие которых ожидается независимо от используемых видов и которые обладают высоким сродством к определенным клеточным органеллам, таким как ядра или молекулы, связанные с метаболические состояния, такие как активные формы кислорода (АФК). Мы проверили реагенты экспериментально, определив, что ядерные красители окрашивают внутриклеточный материал, соответствующий ожидаемым характеристикам ядерной ДНК, или путем активации клеток лекарствами для изменения их метаболического состояния. Затем помеченные образцы запускаются на ImageStream 9.0408 X Mark II (рис. 1А). ImageStream — это коммерчески доступный проточный цитометр на основе изображений, распространение которого в лабораторных условиях увеличивается и который обеспечивает высоковоспроизводимые изображения клеток, которые можно сравнивать в течение нескольких дней сбора данных и экспериментов. Для этого подхода не требуются микрожидкостные устройства или изготовленные на заказ и узкоспециализированные микроскопы (таблица 1), и, при желании, пользователи могут протестировать конвейер Image3C также на изображениях, полученных с помощью стандартных микроскопов, не забывая тщательно контролировать эффекты пакетной обработки.

После того, как изображения отдельных событий собраны для каждого интересующего канала, значения характеристик из морфологических и флуоресцентных данных, таких как размер клетки и размер ядра, извлекаются из изображений клеток с помощью программного обеспечения IDEAS (Amnis Millipore, бесплатно для загрузки после создания учетной записи пользователя Amnis) (рис. 1B; описание функции см. в дополнительных файлах 1 и 2). Вычисляется корреляция между признаками и отсекаются избыточные признаки, а также выборки, которые среди повторов являются выбросами (рис. 2 — рис. дополняет 1 и 2). Это предотвращает артефакты кластеризации, потенциально вызванные наличием нескольких функций, предоставляющих одну и ту же информацию или включающих образцы, которые не являются репрезентативными (рис. 1B). На этом этапе, хотя количество признаков обычно значительно сокращалось, корреляция между повторами всегда была высокой, а выбросы наблюдались редко (рис. 2 — дополнения к рисунку 1 и 2). Наконец, характеристики интенсивности флуоресценции преобразуются для улучшения однородности дисперсии распределений, и, если используется, окрашивание ДНК нормализуется, чтобы устранить дрейф интенсивности между образцами и, таким образом, совместить пики гистограммы содержания ДНК 2N и 4N (рис. 1B, рис. 2 — дополнение к рисунку 3). ).

Количественные оценки экспортированных признаков используются для кластеризации событий. Уменьшение размерности и визуализация кластеров достигается за счет создания графов силовой направленной компоновки (FDL) в среде кластеризации VorteX (рис. 1C) (бесплатная установка) (Samusik et al., 2016). Изображения ячеек для событий в каждом кластере можно визуализировать с помощью FCS Express Plus вместе с пользовательскими сценариями R (рис. 1D). Эти инструменты визуализации и средние значения признаков кластера (, т.е. , среднее значение каждого признака для каждого кластера) (рис. 1E) позволяют исследовать изображения выбранных групп событий и признаки, которые различаются между ячейками, принадлежащими отдельным кластерам. Если включены контрольные и лечебные образцы, в конвейере Image3C также доступен статистический анализ с использованием отрицательной биномиальной регрессии для сравнения количества клеток на кластер между образцами. Этот высокопроизводительный и беспристрастный анализ обеспечивает всестороннее понимание состава клеточной популяции с более высоким разрешением, чем это возможно при использовании традиционных гистологических методов.

После запуска этого конвейера на первом наборе образцов (, например, , гомеостатическое состояние) и для интересующей ткани определены кластеры клеток, изображения и относительные идентификаторы кластеризации можно использовать для обучения классификатора CNN в беспристрастным способом (рис. 1F), включая возможность оценки частоты «новых» типов клеток, которые не соответствуют ни одному из кластеров, идентифицированных при гомеостазе. Таким образом, будущие эксперименты в той же ткани, используемой для обучения классификатора CNN, могут быть проанализированы непосредственно через CNN (рис. 1G). Это значительно сокращает количество шагов и время, необходимое для последующей обработки данных. Еще большее преимущество представляет тот факт, что при отсутствии CNN каждый раз, когда запускаются новые экспериментальные наборы, необходимо было бы снова проходить de novo , кластеризующая часть конвейера (рис. 1B-E), и новый набор кластеров необходимо будет перекрестно аннотировать, чтобы сравнить с составом клеточной популяции, наблюдаемым в предыдущих экспериментах. Ручное сопоставление кластеров между различными экспериментальными наборами может быть источником ошибок, в основном, если пользователь не знаком с типами клеток, присутствующими в образце, и если недоступны конкретные биомаркеры или ранее существовавшие знания о типах и морфологии клеток. CNN разделяет все изображения клеток на классы, определенные на этапе обучения, и позволяет сравнивать количество клеток с одинаковой морфологией среди разных образцов без необходимости перекрестного аннотирования кластеров (рис. 1F, G). Включение CNN в Image3C и воспроизводимость получения изображений с помощью проточной цитометрии на основе изображений позволяет использовать кластеры, определенные в одном эксперименте (9).0003 напр. , гомеостатическое состояние), чтобы беспристрастно настроить классификатор для последующего использования в качестве эталона при анализе влияния экспериментальных манипуляций на эти клеточные популяции. Из этих результатов мы пришли к выводу, что Image3C может выполнить de novo высокопроизводительных характеристик состава популяции и определить изменения конкретных типов клеток между гомеостатическими и экспериментально нарушенными образцами в нескольких экспериментах.

Image3C резюмирует клеточный состав ткани цельного почечного мозга рыбок данио (WKM)

Чтобы проверить, может ли Image3C идентифицировать однородные и биологически значимые клеточные популяции, мы использовали исследовательский организм Danio rerio . Мы получили клетки от взрослых самок рыбок данио WKM (расположение гемопоэтической ткани) в состоянии гомеостаза, окрасили их и прогнали на ImageStream ^X Mark II. Мы проанализировали внутренние морфологические и флуоресцентные особенности, такие как размер клеток и ядер, форма и сигнал темного поля (боковое рассеяние [SSC]). Значения функций были извлечены из каждого изображения ячейки и обработаны с помощью нашего конвейера (см. Дополнительный файл 1 для описания функции). Кластеризация по окончательному набору нормализованных и неповторяющихся морфологических и флуоресцентных признаков дала различные клеточные популяции (рис. 2A–C, рис. 2 — дополнения к рисунку 1–3).

Анализ клеточного состава цельного почечного мозга взрослых рыбок данио (WKM).

( A ) Ткань WKM, полученная от рыбок данио, подготовлена для проточного цитометрического анализа на основе изображений и запущена на ImageStream ^X Mark II (n = 8). Стандартный гейтирование сфокусированных и ядерных событий и ручное выделение большинства эритроцитов выполняли с использованием программного обеспечения IDEAS. Выбранные изображения были обработаны с помощью конвейера, описанного на рисунке 1, и сгруппированы только на основе значений внутренних морфологических и флуоресцентных признаков. График Force-Directed layout (FDL) визуализирует 16 кластеров, и каждый цвет представляет собой уникальный кластер ячеек. ( B ) Репрезентативные изображения клеток, принадлежащие каждому кластеру, показаны для оценки однородности кластера и определения морфологии клеток для аннотации кластера. Репрезентативные клетки для всех идентифицированных кластеров показаны в дополнительном файле 4. Слияние представляет собой наложение сигнала светлого поля (BF) и Draq5 (ядерное окрашивание). ( C ) На корреляционном графике Спирмена показаны средние значения характеристик изображений в каждом кластере, чтобы выделить морфологические сходства и различия между событиями, принадлежащими к разным кластерам, например размер клеток или зернистость цитоплазмы (дополнительный файл 1). ( D ) Коробчатая диаграмма относительного количества событий в каждом кластере соответствует тому же цветовому коду, который использовался в ( A ).

Image3C может различать основные классы клеток, присутствующих в WKM рыбок данио (рис. 2; дополнительные файлы 3 и 4), которые были описаны с использованием стандартной сортирующей проточной цитометрии и подходов к морфологическому окрашиванию (Traver et al., 2003). Примечательно, что Image3C может четко идентифицировать мертвые клетки и дебрис (рис. 2А, В), что позволяет оптимизировать экспериментальные протоколы, чтобы свести к минимуму гибель клеток и проводить последующий анализ только на неповрежденных живых клетках. Image3C может идентифицировать клетки с выдающимися морфологическими особенностями, такие как нейтрофилы из других миеломоноцитов (рис. 2B, C). Основываясь на характеристиках нейтрофилов рыбок данио, таких как высокая гранулярность, высокая сложность и низкая округлость ядер (Lugo-Villarino et al., 2010), этот тип гранулоцитов можно легко отличить. Другие типы миеломоноцитов, такие как моноциты и эозинофилы, здесь объединены в один и тот же кластер, поскольку у рыбок данио они имеют много общих морфологических характеристик (Lugo-Villarino et al., 2010). Точно так же, используя только внутренние морфологические признаки для кластеризации, разные лимфоциты (В- и Т-клетки) и гемопоэтические стволовые клетки нельзя отделить друг от друга, но их можно четко отличить от миеломоноцитов (рис. 2А, В). Во фракции лимфоцитов/предшественников мы находим два кластера ( Dr 1 и Dr 7), которые в основном различаются диаметром клеток (рис. 2C). Будет ли это морфологическое различие иметь биологическое значение, необходимо изучить в будущих экспериментах.

Image3C также позволяет проводить количественную оценку относительной численности популяций клеток (кластеров или классов CNN), что является важным инструментом для сравнения состава популяций в разных группах лечения в разных условиях окружающей среды (Peuß et al., 2020). Здесь мы сравнили наши результаты с ранее опубликованными данными, чтобы подтвердить наш метод. Хотя прямое сравнение с результатами классических подходов (Traver et al., 2003) невозможно, так как мы гейтировали (удаляли аналитически) зрелые эритроциты перед кластеризацией (Материалы и методы), отношение миеломоноцитов к лимфоцитам (отношение M/L = 1,59) аналогичен полученному с помощью классических гистологических подходов (среднее соотношение M/L = 1,35) (рис. 2D; Traver et al., 2003).

Image3C идентифицирует профессиональные фагоциты в ткани рыбок данио WKM

Затем мы попытались определить, можно ли использовать Image3C для характеристики и количественной оценки биологических процессов путем идентификации интересующей ткани и последующего сравнения динамики клеточного состава, функций и физиологических реакций конкретных типов клеток в различных экспериментальных условиях. Наша цель состояла в том, чтобы обнаружить статистически значимые изменения в относительной численности кластеров между контрольными и обработанными образцами, чтобы получить более подробное представление о динамике клеточной популяции и функции отдельных клеток.

В качестве подтверждения концепции мы провели стандартный анализ фагоцитоза с использованием ткани WKM взрослой самки рыбки данио. Суспензию отдельных клеток инкубировали с CellTrace Violet, меченым Staphylococcus aureus (CTV- S. aureus ), и с дигидрородамином-123 (DHR), индикатором АФК, который становится флуоресцентным при окислении, чтобы сообщить об окислительном взрыве после фагоцитоза. В качестве контроля мы ингибировали фагоцитоз за счет нарушения цитоскелета с помощью инкубации цитохалазина B (CCB) или путем инкубации с бактериями при пониженной температуре, помещая культуральные чашки на лед. События, собранные на ImageStream ^X Mark II были проанализированы с помощью Image3C и сгруппированы в 26 отдельных кластеров с использованием количественных оценок морфологических и флуоресцентных признаков (см. Дополнительный файл 2 для описания признаков), включая окрашивание ядер, фагоцитированные S. aureus, и положительный результат DHR (рис. 3A, Рисунок 3—дополнение к рисунку 1). Профессиональные фагоциты определяются по их способности поглощать S. aureus (окрашивание CTV находится в пределах клеточной границы) и индуцировать ответ АФК (яркий сигнал DHR) (Rabinovitch, 19).95). У рыбок данио профессиональные фагоциты в основном представляют собой гранулоциты и моноцитарные клетки, и их можно отличить друг от друга на основании морфологических различий, таких как размер клеток, гранулярность и форма ядер (Wittamer et al., 2011). Для сравнения образцов, инкубированных с CTV- S. aureus , и образцов с ингибированным фагоцитозом (CTV- S. aureus + CCB и CTV- S. aureus + Ice), мы использовали статистический анализ, включенный в Image3C на основе на модели отрицательной биномиальной регрессии (рис. 3B, C, рис. 3 — приложение к рисунку 2; дополнительные файлы 5 и 6). Статистический анализ сообщил о кластерах с различиями в относительной численности между образцами с фагоцитозом и ингибированным фагоцитозом. Визуализация этих сгруппированных изображений событий (дополнительный файл 7) с учетом значений и интенсивности их морфологических и флуоресцентных признаков (дополнительный файл 3) позволила идентифицировать 4 кластера профессиональных фагоцитов: гранулоциты в кластерах Dr 4_P, Dr 12_P и Dr 13_P и моноцитарные клетки в кластере Dr 21_P (рис. 3A, B). Морфология клеток в кластере Dr 12_P характерна для фагоцитирующих нейтрофилов (рис. 2В, рис. 3А), которые становятся адгезивными и образуют внеклеточные ловушки при распознавании бактериальных антигенов (Palić et al., 2007). В целом относительное количество профессиональных фагоцитов составляет 5–10% (рис. 3C), что согласуется с предыдущими исследованиями, в которых оценивалось количество профессиональных фагоцитов в ткани WKM взрослых рыбок данио с использованием классических морфологических подходов (Wittamer et al. , 2011). . Примечательно также, что в соответствии с другими исследованиями (Page et al., 2013) мы не наблюдали скопление лимфоцитов ( напр. , В-клетки), которые активно фагоцитируют бактерии CTV- S. aureus (рис. 2; дополнительный файл 7). По сравнению с классическими морфологическими подходами, Image3C позволяет анализировать тысячи событий высокопроизводительным и беспристрастным образом, позволяя изучать морфологию редких клеток и повышая достоверность и воспроизводимость результатов. Эти результаты показывают, что Image3C может успешно анализировать биологические процессы, поскольку мы смогли повторить наличие, тип клеток и частоту профессиональных фагоцитов в органе WKM взрослых рыбок данио.

Идентификация профессиональных фагоцитов в целом почечном мозге рыбок данио (WKM).

( A ) Анализ фагоцитоза был проведен на клеточной суспензии, полученной из ткани рыбок данио WKM, и затем образцы были проанализированы на ImageStream ^X Mark II (n = 6). На графике принудительной компоновки (FDL) показано 26 кластеров, каждый цвет соответствует уникальному кластеру ячеек. Показаны репрезентативные изображения клеток, принадлежащие к 4 кластерам, содержащим профессиональные фагоциты. Репрезентативные клетки для всех идентифицированных кластеров показаны в дополнительном файле 7. Слияние представляет собой наложение дигидрородамина-123 (DHR) (индикатор активных форм кислорода), CellTrace Violet (CTV) ( S. aureus ) и каналы Draq5 (ядерное окрашивание). Дополнительный файл 2 сообщает о функциях, используемых для этой кластеризации. ( B ) График вулкана иллюстрирует сравнение относительной численности кластеров между образцами фагоцитоза (CTV- S. aureus ) и образцами ингибированного фагоцитоза (CTV- S. aureus + CCB). Изменение логарифмической кратности (logFC) отображается в зависимости от значения p с поправкой на частоту ложных открытий (FDR) (-log ₁₀ ) каждого отдельного кластера, рассчитанного с помощью модели отрицательной биномиальной регрессии (n = 6) (дополнительный файл 5 ). Цвет точек соответствует тому же цветовому коду, который используется в ( А ). ( C ) Коробчатая диаграмма относительного количества событий в 4 кластерах, содержащих профессиональные фагоциты, в 3 образцах: образцы фагоцитоза (CTV- S. aureus ), образцы ингибированного CCB фагоцитоза (CTV- S. aureus + CCB) и образцы фагоцитоза, ингибированного льдом (CTV- S. aureus + Ice) (рис. 3 — дополнение к рисунку 2). Статистически значимые различия рассчитываются с использованием модели отрицательной биномиальной регрессии между образцами фагоцитоза и ингибированного фагоцитоза (дополнительные файлы 5 и 6). ** указывает p≤0,01 и н.с. указывает на незначительное различие после FDR (n = 6).

Новый аспект, который выделил Image3C, заключается в том, что CCB избирательно влияет на жизнеспособность клеток на основе клеточной идентичности, создавая артефакты и повреждения клеток, действия, не специфичные для ингибирования фагоцитоза (рис. 3B). Все кластеры, содержащие зрелые эритроциты, имели значительно более высокое количество клеток в образцах CTV- S. aureus по сравнению с образцами CTV- S. aureus + CCB (рис. 3B; дополнительные файлы 3 и 5). Кластерный анализ показал, что эритроциты почти отсутствовали в образцах, инкубированных с CCB (дополнительный файл 3), в то время как относительное количество кластеров, содержащих мертвые и апоптотические клетки, значительно увеличилось (рис. 3B; дополнительный файл 5). Оба исхода, вероятно, связаны со снижением жизнеспособности клеток эритроцитов при инкубации БКК. Более того, мы исключили возможность более высокой гибели клеток в профессиональных фагоцитах при инкубации БКК, поскольку псевдофагоциты (фагоциты с реакцией DHR, но без интернализированного CTV- S. aureus ) были значительно более распространены в образце CTV- S. aureus + CCB (рис. 3B; дополнительный файл 5). Эти результаты примечательны тем, что Image3C позволил нам наблюдать специфический эффект CCB на жизнеспособность эритроцитов у рыбок данио, который, насколько нам известно, ранее не был описан.

Анализ Image3C также выявил еще одно важное биологическое наблюдение. Когда мы ингибировали фагоцитоз, инкубируя суспензию одиночных клеток на льду (CTV- S. aureus + Ice) и сравнив специфичность ингибирования с образцом CTV- S. aureus + CCB (рис. 3C; дополнительный файл 6), мы обнаружили, что ингибирование фагоцитоза при низкой температуре влияет только на адгезивные нейтрофилы (кластер Dr ). 12_Р) (рис. 3С). Предполагается, что это происходит, поскольку лед ингибирует адгезию, в то время как CCB эффективно блокирует фагоцитоз во всех профессиональных фагоцитах в ткани WKM рыбок данио, воздействуя на цитоскелет. Использование Image3C позволило нам специфически идентифицировать типы клеток, чувствительные к низкой температуре, и те, которые не чувствительны, подтверждая существование различных механизмов фагоцитоза и предоставляя дополнительные знания о плюсах и минусах различных протоколов, которые можно применять для ингибирования фагоцитоза на основе конкретные цели и потребности.

Image3C резюмирует состав клеток гемолимфы пресноводной улитки

Поскольку мы стремились предоставить широко применимый инструмент, мы протестировали универсальность Image3C на яблочной улитке Pomacea canaliculata, новом организме, для которого инструменты молекулярной и клеточной биологии еще не полностью разработаны. Таким образом, мы повторили те же эксперименты, что и у рыбок данио, на гемолимфе P. canaliculata. Для морфологического исследования клеточного состава гемолимфы, собранной у взрослых женщин в условиях гомеостаза, мы окрашивали суспензии отдельных клеток с помощью Draq5 (краситель ДНК) и запускали на ImageStream 9.0408 X Марк II. Мы использовали Image3C для анализа изображений событий и определили 9 кластеров клеток (рис. 4А, рис. 4 — дополнение к рисунку 1). Два из этих кластеров состояли из клеточных дублетов, дебриса и мертвых клеток (кластеры Pc 5 и Pc 8), а другие кластеры на основе просмотра изображений клеток были сгруппированы в две основные категории (рис. 4A; дополнительный файл 8). ). К первой категории относятся мелкие бластоподобные клетки (кластер Pc 4) и промежуточные клетки (кластеры Pc 2 и Pc 3) с высоким ядерно-цитоплазматическим (N/C) соотношением. Эти клетки морфологически напоминают гемоциты группы I, ранее описанные с использованием классического морфологического подхода (Accorsi et al., 2013). Вторая категория включала более крупные клетки с более низким отношением N/C и обильными выпячиваниями мембраны (кластеры Pc 1, Pc 6, Pc 7 и Pc 9). Вероятно, эти клетки соответствуют описанным ранее гемоцитам группы II, включающим как гранулярные, так и агранулярные клетки (Accorsi et al., 2013).

Анализ

популяции гемоцитов P. canaliculata с использованием только внутренних морфологических признаков клеток.

( A ) Гемоциты, полученные от яблочной улитки P. canaliculata , подготовлены для проточного цитометрического анализа на основе изображений и запущены на ImageStream ^X Mark II (n = 5). Стандартный гейт сфокусированных и зародышевых событий был выполнен с использованием программного обеспечения IDEAS. Выбранные изображения были обработаны с помощью конвейера, описанного на рисунке 1, и сгруппированы только на основе значений внутренних морфологических и флуоресцентных признаков. График Force-Directed layout (FDL) используется для визуализации 9идентифицированные кластеры, и каждый цвет представляет собой уникальный кластер ячеек. Репрезентативные изображения клеток, принадлежащие каждому кластеру, показаны для оценки однородности кластера и определения морфологии клеток для аннотации кластера. Дополнительные репрезентативные клетки для всех идентифицированных кластеров показаны в дополнительном файле 8. Слияние представляет собой наложение сигнала светлого поля (BF) и Draq5 (ядерное окрашивание). ( B ) На корреляционном графике Спирмена показаны средние значения характеристик изображений в каждом кластере, чтобы выделить морфологические сходства и различия между событиями, принадлежащими к разным кластерам, например размер клеток или зернистость цитоплазмы (дополнительный файл 1). Кластер Pc 6 является одним из крупных гемоцитов с более высокими значениями характеристик, описывающих гранулярность цитоплазмы (, т.е. , гранулярность площади № 2, гранулярность интенсивности № 18 и гранулярность сигнала № 11). ( C ) Коробчатая диаграмма относительного количества событий в каждом кластере с тем же цветовым кодом, который использовался в ( A ). Кластеры Pc 5 и Pc 8, состоящие из дуплетов и мертвых клеток, имеют наименьшее количество событий, что подтверждает протокол, использованный для подготовки этих образцов.

Чтобы определить, какие из этих кластеров были обогащены гранулированными ячейками, мы рассмотрели тепловую карту со значениями функций для каждого отдельного кластера (рис. 4B; см. Дополнительный файл 1 для описания функции). Кластер Pc 6 имел самые высокие значения характеристик, связанных с текстурой и гранулярностью цитоплазмы (, т.е. , гранулярность площади, гранулярность интенсивности и гранулярность сигнала) среди всех кластеров, кроме дублетов клеток (рис. 4B; дополнительные файлы 3 и 8) . На основании этих данных мы выделили кластер Pc 6 как содержащий зернистые гемоциты. Кластеры, полученные с помощью Image3C, были не только гомогенными и биологически значимыми, но также соответствовали опубликованной классификации гемоцитов P. canaliculata , полученной классическими морфологическими методами (Accorsi et al., 2013). Такая замечательная согласованность наблюдалась как с точки зрения идентифицированной клеточной морфологии, так и их относительной численности в популяции циркулирующих гемоцитов (рис. 4C; дополнительный файл 8). Например, относительная численность ранее зарегистрированных мелких бластных клеток составляет 14,0%, что почти идентично численности соответствующего кластера 9.0003 ПК 4 (13,8%).

Аналогичным образом, категория более крупных гемоцитов или гемоцитов группы II составляет 80,4% циркулирующих клеток при измерении традиционными морфологическими методами, в то время как кластеры Pc 1, Pc 6, Pc 7 и Pc 9 вместе взятые представляют 72,4% событий, проанализированных с помощью Image3C (рис. 4C; дополнительный файл 3). Подгруппой этих клеток являются зернистые клетки (кластер Pc 6), которые по классическим гистологическим методам соответствуют 7,7% всех гемоцитов и 8,9% всех гемоцитов.% от Image3C. Промежуточные ячейки (кластеры Pc 2 и Pc 3) наименее представлены в обоих подходах с относительной численностью 5,6% и 10,6% для событий, проанализированных вручную и Image3C, соответственно (рис. 4C; дополнительный файл 3). . Эта разница, вероятно, лучше всего объясняется заметной разницей как в количестве ячеек, так и в количестве функций, которые могут быть рассмотрены для анализа Image3C. Только несколько сотен гемоцитов были визуально проанализированы с использованием традиционных гистологических методов, основанных только на диаметре клеток и соотношении N/C (Accorsi et al., 2013). Напротив, автоматизированный конвейер, используемый Image3C, упростил анализ 10 000 ядерных событий для каждого образца и рассмотрел 25 морфологических признаков для каждой клетки. Значительно большее количество морфологических признаков, одновременно рассматриваемых Image3C, также объясняет большее количество кластеров и улучшенное разрешение для различения типов клеток по сравнению с традиционными методами. Следовательно, Image3C не только может правильно анализировать клетки, полученные от нового исследовательского организма, создавая биологически значимые и информативные кластеры, но также обеспечивает беспрецедентное повышение точности идентификации типа клеток по сравнению с традиционными гистологическими методами, а также обеспечивает высокую пропускную способность.

Image3C идентифицирует клетки, способные к фагоцитозу, в гемолимфе пресноводной улитки

Как и в случае с рыбками данио, мы также провели эксперимент по фагоцитозу гемоцитов из P. canaliculata . Наша цель состояла в том, чтобы проверить, возможно ли с помощью нового исследовательского организма успешно обнаружить фенотипы и функции клеток и получить информацию о конкретных представляющих интерес биологических процессах, используя Image3C для сравнения популяций клеток среди обработанных и контрольных образцов.

Здесь мы настраиваем анализ фагоцитоза, инкубируя клетки с CTV- S. aureus и DHR при комнатной температуре. Фагоцитоз ингибировали в качестве контроля либо путем добавления ЭДТА (CTV- S. aureus + ЭДТА), либо с использованием низкой температуры путем инкубации образцов на льду (CTV- S. aureus + лед). События, собранные на ImageStream ^X Mark II, были проанализированы с помощью Image3C и сгруппированы в 20 отдельных кластеров с использованием количественных оценок морфологических и флуоресцентных признаков (см. Дополнительный файл 2 для описания функций), включая окрашивание ядер, фагоцитированные S. aureus, и положительный результат DHR (рис. 5A, рис. 5 — дополнение к рисунку 1). Мы сравнили образцы, допускающие фагоцитоз (CTV- S. aureus ), с образцами, в которых фагоцитоз ингибировался инкубацией с ЭДТА или низкой температурой, с использованием статистического анализа, включенного в Image3C, на основе модели отрицательной биномиальной регрессии (рис. 5B, C, рис. 5). — приложение к рисунку 2; дополнительные файлы 9 и 10). Кластеры с относительной численностью значительно выше в образцах фагоцитоза (рис. 5B; дополнительные файлы 3 и 11) и с высокой интенсивностью сигналов как DHR, так и бактерий (рис. 5 — дополнения к рисунку 3 и 4) — это два кластера, которые мы идентифицируем как обогащенные. с профессиональным фагоцитом (кластер Pc 5_P и Pc 17_P) (рис. 5B, рис. 4 — дополнение 1 к рисунку, рис. 5 — дополнение 4 к рисунку; дополнительный файл 11). Два кластера показывают различную интенсивность сигнала DHR (ответ АФК) друг от друга при воздействии бактерий (кластер Pc 5_P с высоким сигналом DHR, кластер Pc 17_P с низким сигналом DHR) (рис. 5 — дополнение к рисунку 3; дополнительные файлы). 3 и 11). Относительная численность Pc 5_P и Pc 17_P значительно выше в образцах фагоцитоза по сравнению с образцом, обработанным ЭДТА (рис. 5C; дополнительный файл 9).), показывая, что ЭДТА эффективно ингибирует фагоцитоз обоих типов профессиональных фагоцитов. Однако в образце, где фагоцитоз ингибировался низкой температурой, только кластер Pc 17_P имел значительно более низкую относительную численность по сравнению с образцом фагоцитоза (рис. 5C, рис. 3 — дополнение к рисунку 2; дополнительный файл 10). Мы можем сделать вывод, что подобно ингибированию CCB в эксперименте по фагоцитозу рыбок данио, ЭДТА является более эффективным и генерализованным (не специфичным для типа клеток) ингибитором фагоцитоза, чем низкая температура. Эти результаты показывают, что Image3C позволил обнаружить новые аспекты этого биологического процесса и в появляющемся исследовательском организме и выявил различия между профессиональными фагоцитами, которые было бы трудно обнаружить с помощью других методов.

Идентификация профессиональных фагоцитов среди

P. canaliculata гемоцитов.

( A ) Анализ фагоцитоза был проведен на клеточной суспензии, полученной из гемолимфы яблочной улитки P. canaliculata , а затем образцы были обработаны на ImageStream ^X Mark II (n = 5). На графике принудительной компоновки (FDL) показано 20 кластеров, каждый цвет соответствует уникальному кластеру ячеек. Показаны репрезентативные изображения клеток, принадлежащие к двум кластерам, содержащим профессиональные фагоциты. Репрезентативные клетки для всех идентифицированных кластеров показаны в дополнительном файле 11. Слияние представляет собой наложение дигидрородамина-123 (DHR) (индикатор активных форм кислорода), CellTrace Violet (CTV) ( S. aureus ) и каналы Draq5 (ядерное окрашивание). Дополнительный файл 2 сообщает о функциях, используемых для этой кластеризации. ( B ) График вулкана иллюстрирует сравнение относительной численности кластеров между образцами фагоцитоза (CTV- S. aureus ) и образцами ингибированного фагоцитоза (CTV- S. aureus + ЭДТА). Изменение логарифмической кратности (logFC) отображается в зависимости от значения p с поправкой на частоту ложных открытий (FDR) (-log ₁₀ ) каждого отдельного кластера, рассчитанного с помощью модели отрицательной биномиальной регрессии (n = 4) (дополнительный файл 9). Цвет точек соответствует тому же цветовому коду, который используется в ( A ). ( C ) Коробчатая диаграмма относительного количества событий в двух кластерах, содержащих профессиональные фагоциты, в 3 образцах: образцы фагоцитоза (CTV- S. aureus ), образцы фагоцитоза, ингибированного ЭДТА (CTV- S. aureus + ЭДТА) и образцы ингибированного льдом фагоцитоза (CTV- S. aureus + лед) (рис. 5 — дополнение к рисунку 2). Статистически значимые различия рассчитываются с использованием модели отрицательной биномиальной регрессии между образцами фагоцитоза и ингибированного фагоцитоза (дополнительные файлы 9).и 10). ** указывает p≤0,01 и н.с. указывает на незначительное различие после FDR (n = 4).

Анализ данных с помощью Image3C ясно показал, что CCB и EDTA, два классических ингибитора фагоцитоза, обычно используемые в контроле для экспериментов по фагоцитозу у позвоночных и беспозвоночных, соответственно, приводят к резкому изменению морфологии и жизнеспособности клеток. Это последствие нелегко обнаружить другими методами, и поэтому его часто упускают из виду. В настоящей работе эти изменения значительно изменили общее количество и распределение клеточных кластеров и указывают на то, что влияние CCB и EDTA на морфологию клеток следует принимать во внимание при любом исследовании морфологических особенностей клеток со свойствами фагоцитоза, поскольку артефакты могут быть значительными.

CNN позволяет провести беспристрастное сравнение экспериментов

При определении различий между контрольной и экспериментальной обработкой Image3C обязательно объединяет изображения и данные из всех образцов, а затем группирует клетки. Это необходимо учитывать при планировании эксперимента. Эксперименты, предназначенные для анализа клеточного состава и морфологического разнообразия в одном биологическом домене (, например, , состояние гомеостаза) (рис. 2, рис. 4), следует проводить отдельно от экспериментов в других доменах, которые могут внести изменения в состав клеточной популяции или клеточные морфологии, представляющие смешанный фактор для de novo кластеризация в состоянии гомеостаза. Кластеризация Image3C лучше всего работает при одновременном использовании только на образцах, принадлежащих к одной экспериментальной области, такой как анализ гомеостаза или фагоцитоза. Проблема, которая возникает при независимом анализе различных экспериментальных наборов, заключается в увеличении времени, необходимого для аналитических шагов, вероятности внесения ошибок и необходимости неоднократно аннотировать кластеры на графике FDL, полученном из каждого экспериментального набора. Этот последний элемент необходим для сравнения поведения типов клеток в нескольких экспериментах и обеспечения общего понимания их функций и реакции на лечение ( , т. е. , нельзя ожидать, что кластер №1 из одного аналитического прогона будет соответствовать клеточной морфологии с кластером №1 из другого прогона, поскольку в процессе присутствует стохастический элемент).

Этот последний пункт, вероятно, является наиболее сложным, поскольку ошибки могут быть легко допущены из-за предвзятости пользователя или отсутствия достаточных ранее существовавших знаний о морфологии клеток или клеточных биомаркерах, которые позволили бы уверенно перекрестно аннотировать несколько графиков FDL. Кроме того, мы заметили, что количество кластеров резко увеличивается при включении обработок, влияющих на клеточные морфологические свойства клетки. Например, хотя мы обнаружили 9уникальные кластеры в наивных образцах гемолимфы, мы обнаружили 20 кластеров в эксперименте по фагоцитозу (рис. 3А, рис. 4А). Отчасти это связано с тем, что профессиональные фагоциты меняют свою морфологию при обнаружении патогенов (Palić et al., 2007), создавая тем самым новые кластеры. Точно так же сложность кластеризации также увеличивается из-за обработки, такой как инкубация CCB и EDTA, которая необходима для обеспечения идентификации профессиональных фагоцитов, но оказывает сильное влияние на морфологию клеток, что делает этапы кластеризации и аннотации более сложными и трудоемкими. склонен к ошибкам, поскольку обработанные образцы содержат аберрантные популяции, не обнаруженные при гомеостазе (рис. 5А; дополнительный файл 11).

Чтобы предоставить альтернативу для оптимизации анализа нескольких экспериментальных наборов при начальной кластеризации de novo и идентификации типа клеток в образцах гомеостаза, мы включили в Image3C возможность использовать эти исходные изображения и их идентификаторы кластеров для обучения CNN без ручного классификация изображений (рис. 1). Затем этот обученный классификатор можно использовать для назначения изображений клеток, впоследствии собранных из дополнительных экспериментальных наборов, одному из кластеров, определенных в условиях гомеостаза, высокопроизводительным способом. Таким образом, можно будет определить поведение определенного типа клеток с помощью нескольких экспериментальных наборов без повторной кластеризации при каждом получении новых данных. Решающим элементом, который позволяет использовать этот подход, также является ImageStream 9.0408 X Система Mark II, которая обеспечивает высоковоспроизводимые и сопоставимые изображения клеток, полученные в разных экспериментах и в разные дни, внося гораздо меньшую изменчивость, чем стандартная световая или электронная микроскопия.

Для нашего конвейера была развернута CNN (LeCun et al., 1989), основанная на архитектуре DenseNet (Huang et al., 2017), для (1) использования в качестве обучающего набора изображений и кластеров, полученных из первая группа образцов (, например, , условия гомеостаза, наивные клетки или образцы WT), беспристрастно проанализированные de novo кластеризации и (2) назначить новые изображения клеток, полученные с помощью системы ImageStream ^X Mark II, соответствующим классам. В качестве доказательства концепции мы использовали кластеры, идентифицированные для гемоцитов P. canaliculata в состоянии гомеостаза, с первой частью конвейера (рис. 4А) для обучения и настройки классификатора CNN. Этот подход будет определять классы на основе беспристрастной кластеризации de novo тысяч клеток без необходимости формальной аннотации или предварительных знаний о типах клеток и составе тканей. Чтобы подготовить набор данных для обучения классификатора, мы сначала объединили кластеры, сильно перекрывающиеся друг с другом по морфологическим признакам (9).0003 напр. , дублеты и мертвые клетки) для повышения точности классификатора (рис. 6А). Мы использовали 80% клеток, полученных в исходном наборе данных P. canaliculata , вместе с идентификаторами их кластеров для обучения классификатора посредством более чем 25 000 итераций. После каждой итерации мы тестировали обучение с 10% исходного набора данных и определяли относительную точность, оценивая количество ячеек, идентификатор кластера которых, назначенный классификатором, совпадал с исходным идентификатором кластера (рис. 6B, C). Оставшиеся 10% исходного набора данных использовались для расчета точности обученного классификатора. Кластеры с более высокими числами поддержки получили более высокие оценки точности. Средневзвешенный показатель точности (f1-показатель, средний показатель точности по кластерам с учетом опорных чисел), равный 0,75, является относительно высоким, учитывая сложность фенотипа (изображения светлого поля [BF], темного поля и изображения Draq5) (рис. 6D) и сопоставим с другие исследования с использованием ML для классификации клеток (Blasi et al., 2016). Совпадение истинной вероятности для каждой отдельной ячейки (вероятность для каждой ячейки того, что класс, назначенный классификатором, совпадет с исходным идентификатором кластера) показало, что более низкие совпадения истинной вероятности имели место там, где кластеры сильно перекрывались, или где фенотипы клеток были промежуточными между кластерами, обеспечивая дополнительную слой информации о нашем наборе данных (рис. 6D).

Обучение классификатора и использование сверточной нейронной сети (CNN) для интеграции нескольких экспериментов.

( A ) Часть CNN в Image3C позволяет интегрировать несколько экспериментов и анализировать дополнительные образцы, назначая новые события уже определенным и аннотированным кластерам без ручного и потенциально предвзятого сопоставления кластеров пользователем. Изображения клеток, полученных из образцов гомеостаза, наивных или WT и уже de novo , беспристрастно сгруппированные Image3C, экспортируются в виде файлов TIFF вместе с их идентификаторами кластеров. гемоцитов P. canaliculata в состоянии гомеостаза, полученных от самок яблочных улиток (35 000 изображений), — это набор данных, используемый для обучения классификатора CNN. Перед обучением кластеры с ячейками с сильно перекрывающейся морфологией были объединены ( ПК 1 объединены с ПК 9 и названы ПК 1_CT; ПК 5 объединены с ПК 8 и названный Pc 5_CT). КТ: обучение классификатору. ( B ) Обучение проводилось на 80% экспортированных изображений, а тестирование во время обучения проводилось на 10% экспортированных изображений. Относительная точность регистрировалась каждые 100 итераций, всего 25 000 итераций. ( C ) Расчет потерь записывался каждые 100 итераций, всего 25 000 итераций, и указывает на то, что обучающий набор не запоминается. ( D ) Вероятность истинного совпадения (вероятность того, что кластер, назначенный обученным классификатором, соответствует исходному идентификатору кластера) дается для каждой ячейки из оставшихся 10% исходных экспортированных изображений. Подробная оценка точности для каждого кластера вместе со средневзвешенным значением (с поправкой на поддержку) представлена в таблице. ( E ) Классификатор CNN позволяет интегрировать эксперименты, такие как анализ фагоцитоза и морфологический анализ, с минимальной вероятностью внесения ошибок из-за отсутствия биомаркеров. На графике показано распределение клеток, принадлежащих кластерам профессиональных фагоцитов улитки ( Pc 5_P и Pc 17_P на рис. 5, анализ фагоцитоза) среди кластеров, определенных по морфологическим признакам с использованием условий гомеостаза. ( F ) Классификатор CNN также позволяет анализировать новые образцы, полученные от тех же видов и той же ткани, которые использовались для обучения. В новых событиях получен бегущий мужчина Гемоциты P. canaliculata распределяются по кластерам, определенным на этапе кластеризации de novo , что позволяет сравнивать образцы (самки и самцы) и проводить статистический анализ относительной численности кластеров. На блочной диаграмме показано сравнение состава популяции гемоцитов у женщин и мужчин (n = 5). *** представляют собой кластеры, численность которых существенно различается между самками и самцами животных. * представляют собой кластеры с p-значением ниже 0,05, но численность которых не более существенно различается после поправки на множественное тестирование (коэффициент ложного обнаружения [FDR]). ( G ) Репрезентативные изображения клеток для каждого кластера, принадлежащего набору данных женских и мужских гемоцитов, позволяют визуально сравнивать клетки, используемые для обучения классификатора (женщины), с клетками, назначенными классификатором и поступающими из нового набора образцов (мужчины). Световое поле (BF), сигнал бокового рассеяния (SSC) и сигнал Draq5 (ядерное окрашивание) показаны в отдельных каналах.

Чтобы проверить эффективность этого конвейера, мы извлекли все изображения, принадлежащие двум кластерам, идентифицированным в анализе фагоцитоза как содержащие кластеры фагоциты, и определили, какому наивному типу клеток они соответствуют, используя классификатор CNN и только BF, SSC и Drq5 каналов ( , т.е. , сигналы DHR и меченых бактерий не использовались). Мы обнаружили, что 59,4, 6,2 и 9,2% фагоцитов принадлежали к кластеру Pc 1_CT, Pc 6_CT и Pc 7_CT соответственно (рис. 6E), где CT обозначает обучение классификатора. Эти результаты подтвердили ранее опубликованный результат, в котором использовалось классическое морфологическое окрашивание и ручная аннотация, чтобы сделать вывод о том, что гемоциты, способные к фагоцитированию, были в основном гемоцитами группы II (Accorsi et al., 2013). Только 8% фагоцитов были сгруппированы в гемоцитах группы I, представленных здесь кластерами 9.0003 Pc 2_CT, Pc 3_CT и Pc 4_CT, а остальные 17,2% были отнесены CNN к кластеру Pc 5_CT, состоящему из дублетов и мертвых клеток (рис. 6E). Этот результат можно объяснить тем, что фагоцитоз in vitro запускает образование микроагрегатов (гемоцитарно-гемоцитарная адгезия) в гемоцитах беспозвоночных, которое напоминает образование узелков, наблюдаемое in vivo (Walters, 1970). Важно наблюдать, как этот анализ позволил нам отнести фагоциты к типам клеток, используя аннотацию, уже выполненную на рисунке 4A (9).0003 de novo кластеризация гемоцитов в состоянии гомеостаза) без необходимости реаннотировать FDL, полученный во время анализа фагоцитоза (фиг. 5A).

Чтобы проверить адаптируемость обученной CNN к новым наборам данных, мы собрали гемоциты из образцов самцов яблочной улитки, окрасили клетки с помощью Draq5 и записали изображения BF, SSC и ядер из 10 000 клеток на ImageStream ^X Mark II как ранее описано. Мы извлекли изображения клеток и использовали обученный классификатор CNN, чтобы определить относительное количество гемоцитов, собранных у самцов улиток, в семи классах классификатора (рис. 6F). Во-первых, мы визуально сравнили женские гемоциты, сгруппированные по de novo кластеризуется с мужскими гемоцитами, которые были запущены на ImageStream ^X Mark II и были отнесены к классу классификатором (рис. 6F). Это сравнение показывает, что женские и мужские гемоциты, принадлежащие к одному и тому же кластеру, морфологически очень похожи и отличаются от гемоцитов, отнесенных к другим кластерам (рис. 6F). Это демонстрирует, что классификатор CNN можно обучить с первой группой образцов, а затем он может успешно анализировать новые наборы данных, полученные позже. Сравнение состава женских и мужских гемоцитов показало, что кластеры, значительно различающиеся по относительной численности, составляют Pc 1_CT и Pc 7_CT (группа II агранулярных больших гемоцитов) и Pc 6_CT (группа II зернистых больших гемоцитов) (рис. 6F). Примечательно, что предыдущие исследования не выявили различий между составом гемоцитов самок и самцов посредством ручной классификации и подсчета с использованием классического морфологического подхода (Accorsi et al., 2013). Напротив, представленные здесь уменьшенная предвзятость пользователей и высокопроизводительный анализ позволили нам определить, что одна из двух субпопуляций агранулярных больших гемоцитов была значительно более распространена у самок животных ( Pc 1_CT: 53 и 38% у самок и самцов соответственно), в то время как другие агранулярные ( Pc 7_CT), а также гранулярные крупные гемоциты ( Pc 6_CT) были значительно более распространены у самцов животных ( Pc 7_CT: 14 и 20% у женщин и мужчин соответственно; Pc 6_CT: 6 и 10% у женщин и мужчин соответственно) (рис. 6F).

Хотя биологическое значение этого наблюдения не будет рассматриваться в данной статье, это открытие подчеркивает возможности анализа Image3C по сравнению с традиционными методами определения и количественного определения состава клеточных популяций. Эти эксперименты демонстрируют, что Image3C в сочетании с представленным сверточным классификатором может анализировать большие наборы экспериментальных данных и определять значимость с небольшими размерами эффекта. Важно отметить, что анализ Image3C не зависит от предубеждений наблюдателя и не требует предварительных знаний об ожидаемом составе ткани или ожидаемом влиянии лечения на морфологию клеток.

Заключение

Мы разработали новый мощный метод для анализа с разрешением одной клетки состава любой клеточной популяции, полученной от исследовательских организмов, для которых необходимы видоспецифические реагенты (например, антитела с флуоресцентной меткой), биомаркеры, атласы одиночных клеток или высокоэффективные качественный геном для подхода scRNA-seq недоступен. Мы продемонстрировали, что Image3C может идентифицировать различные клеточные популяции на основе морфологии и/или функции через de novo 9.0004 сгруппировать и выделить важные изменения в количестве типов клеток и составе клеточной популяции, вызванные экспериментальными или естественными возмущениями (пол, лечение, экспериментальный протокол). Image3C ни в коем случае не требует предварительных знаний о составе ткани или маркерах, специфичных для типа клеток, хотя, если они доступны, их можно включить и использовать. Кроме того, в сочетании с классификатором CNN, обученным на этих кластерах, мы демонстрируем, что Image3C способен к беспристрастному и высокопроизводительному анализу больших наборов экспериментальных данных, что позволяет сравнивать поведение определенного типа клеток или состав популяции в нескольких экспериментах. Image3C чрезвычайно универсален и может быть применен к любой интересующей популяции тканей или клеток, а также может быть адаптирован к различным экспериментальным проектам. Хотя Image3C был разработан в ответ на необходимость анализа клеточного состава тканей новых исследовательских организмов, инструмент Image3C потенциально может быть использован также для добавления к набору транскриптомных данных дополнительного слоя информации, основанного на морфологии клеток. Учитывая недавний прогресс в проточной цитометрии на основе изображений, которая позволяет захватывать изображения вместе с сортировкой клеток (Nitta et al. , 2018), подход scRNA-seq в сочетании с конвейером Image3C позволит проводить одновременный анализ как морфологических/фенотипических, так и генетических свойства клеточной популяции при разрешении одной клетки.

Материалы и методы

Draq5

Reagent type (species) or resource	Designation	Source or reference	Identifiers	Additional information
Strain, strain background ( Staphylococcus aureus )	Wood штамм без белка A	Thermo Fisher Scientific	S2859
Биологический образец ( Danio rerio )	Whole kidney marrow	Stowers Institute for Medical Research	Wild type, adult females	Freshly isolated from Danio rerio
Biological sample ( Pomacea canaliculata )	Hemolymph	Stowers Institute for Medical Research	Дикий тип, взрослые самки и самцы	Свежевыделенные из Pomacea canaliculata
Chemical compound, drug	Dihydrorhodamine-123 (DHR)	Thermo Fisher Scientific	D23806	5 µM
Software, algorithm	IDEAS	Amnis Millipore Sigma	Version 6. 2
Software , алгоритм	Код R	Эта статья		https://github.com/stowersinstitute/LIBPB-1390-Image3C (Box, 2021)
Программное обеспечение, алгоритм	VorteX clustering environment	https://github.com/nolanlab/vortex/releases
Software, algorithm	FSC Express	De Novo Software	Image or Plus configurations — Version 7
Программное обеспечение, алгоритм	Скрипт Python	Этот документ		https://github.com/stowersinstitute/LIBPB-1390-Image3C
Другое	0691	Thermo Fisher Scientific	62251	5 µM
Other	CellTrace Violet (CTV)	Thermo Fisher Scientific	C34571	5 µM

Коллекция рыбок данио WKM

Запросить подробный протокол
Взрослых самок данио дикого типа в возрасте 12 месяцев подвергали эвтаназии холодным раствором MS-222 с концентрацией 500 мг/л в течение 5 мин. WKM препарировали, как описано ранее (Traver et al., 2003), и переносили в клеточный фильтр 40 мкм с 1 мл среды L-15, содержащей 10% воды, 10 мМ HEPES и 20 ЕД/мл гепарина (L-9).0). Клетки осторожно пропускали через клеточный фильтр с помощью поршня одноразового шприца объемом 3 мл. Фильтр один раз промывали 1 мл L-90, и полученную суспензию отдельных клеток центрифугировали при 500 rcf при 4 °C в течение 5 минут. Супернатант удаляли, а клетки ресуспендировали в 1 мл L-90, содержащего 5% фетальной телячьей сыворотки (FCS), 4 мМ L-глутамина и 10000 ЕД пенициллина и стрептомицина (среда L-90). Клетки подсчитывали в разведении 1:20 на проточном цитометре EC-800 (Sony) с использованием характеристик рассеяния.
Сбор гемоцитов яблочной улитки
Запросить подробный протокол
Образцы яблочной улитки P . canaliculata (Mollusca, Gastropoda, Ampullariidae) содержались и размножались в неволе, в системе оборотного водоснабжения, заполненной искусственной пресной водой (2,7 мМ CaCl ₂ , 0,8 мМ MgSO ₄ , 1,8 мМ NaHCO _{3 9099: 5000 Remineralize Balanced Minerals в жидкой форме [Brightwell Aquatics]). Улиток кормили два раза в неделю и содержали при цикле свет:темнота 10:14. Взрослые улитки дикого типа, 7–9месячного возраста и с размером раковины 45–60 мм, перед забором гемолимфы подвергались голоданию в течение 5 сут (Accorsi et al., 2013). Если не указано иное, для экспериментов использовали самок улиток. Изъятие выполняли, оказывая давление на жаберную покрышку и опуская гемолимфу непосредственно в ледяную трубку. Гемолимфу, собранную от разных животных, не объединяли. Гемолимфу немедленно разбавляли 1:4 в среде Bge + 10% эмбриональной телячьей сыворотки (FBS) и затем центрифугировали при 500 rcf в течение 5 мин. Осадок клеток ресуспендировали в 100 мкл среды Bge + 10% FBS. Среда Bge (также известная как Biomphalaria glabrata , среда эмбриональных клеток) состоит из 22% (об./об.) среды Schneider Drosophila , 4,5 г/л гидролизата лактальбумина, 1,3 г/л галактозы, 0,02 г/л гентамицина в воде MilliQ, pH 7,0.}
Эксперимент 1: анализ морфологии в условиях гомеостаза
Запросить подробный протокол
клетки WKM из рыбок данио выделяли, как описано ранее, и помещали в количестве 4 × 10 ⁵ клеток/лунку в 96-луночный планшет в 200 мкл среды L-90 и инкубировали в течение 3 ч при комнатной температуре. Клетки окрашивали 5 мкМ Draq5 (Thermo Fisher Scientific) в течение 10 минут, а затем запускали на ImageStream 9.0408 X Mark II (Amnis Millipore Sigma), где для каждого образца было зарегистрировано 10 000 ядерных и фокусированных событий (n = 8). Эритроциты удаляли для обогащения иммунорелевантными клетками и предотвращения сверхкластеризации в последующем анализе. Последнее связано с тем, что эритроциты рыб содержат ядра, и их двояковогнутая форма приводит к различным значениям морфологических признаков только в зависимости от их ориентации во время получения изображения.
Гемоциты P. canaliculata окрашивали 5 мкМ Draq5 в течение 10 минут, переносили на лед и затем анализировали на ImageStream 9.0408 X Mark II, где для каждого образца было отображено 10 000 ядерных и сфокусированных событий (n = 5).
Эксперимент 2: анализ фагоцитоза
Запросить подробный протокол
Staphylococcus aureus (Thermo Fisher Scientific) ресуспендировали в PBS в конечной концентрации 100 мг/мл и инкубировали с 5 мкМ CTV (Thermo Fisher Scientific) в течение 20 мин. Меченые бактерии центрифугировали и трижды ресуспендировали в PBS для удаления несвязавшегося красителя, а затем хранили при -20 °C в виде одноразовых аликвот. Клетки, полученные из WKM рыб или гемолимфы улиток и в виде суспензии отдельных клеток, высевали на 96-луночный планшет с концентрацией 4 × 10 ⁵ клеток/лунку в 200 мкл среды и инкубировали с 2 × 10 ⁷ CTV-связанными S. aureus /лунку в течение 3 ч при комнатной температуре. В качестве контроля фагоцитоз инкубировали при инкубации смеси клеток + CTV- S. aureus либо на льду (для обоих видов), либо с 0,08 мг/мл CCB для клеток рыбок данио, либо с 30 мМ ЭДТА и 10 мМ HEPES для клеток яблочной улитки. (Куэто и др., 2015; Ли и др., 2006). Через 2 часа 30 минут мы добавили 5 мкМ DHR (Thermo Fisher Scientific) к клеточной суспензии, чтобы окрасить клетки, положительные на продукцию АФК. Чтобы контролировать эту обработку с помощью DHR, мы инкубировали одну аликвоту клеток с 10 нг/мл форбол-12-миристата-13-ацетата (PMA), чтобы индуцировать продукцию АФК. Через 2 ч 50 мин от начала инкубации с CTV- S. aureus , все образцы окрашивали 5 мкМ Draq5 в течение 10 мин. После 3-часовой инкубации с бактериями клетки перемещали и хранили на льду, а затем запускали на ImageStream ^X Mark II, где для каждого образца визуализировали 10 000 ядерных и сфокусированных событий (по крайней мере, n = 4 улитки и n = 6 рыб). со скоростью 1000 кадров в секунду.
Сбор данных на ImageStream
^X Mark II Запросить подробный протокол
После подготовки клеток данные были получены из каждого образца на ImageStream 9.0408 X Mark II при 60-кратном увеличении, низкая/чувствительная скорость потока (1000 изображений/с), лазерное возбуждение с длиной волны 633, 488 и 405 нм. BF был получен на каналах 1 и 9, DHR (возбуждение 488 нм) на канале 2, CTV- S. aureus (возбуждение 405 нм) на канале 7, Draq5 (возбуждение 633 нм) на канале 11, а SSC был получен на канал 6. Для каждого флуоресцентного канала также были получены одноцветные контроли, чтобы обеспечить коррекцию распространения флуоресценции.
Анализ данных и
de novo идентификатор кластера Запросить подробный протокол
Интерактивная карта, представляющая конвейер, используемое программное обеспечение, формат экспортируемых файлов и приблизительное время, необходимое для выполнения отдельных шагов, представлена на рис. 1 — дополнение к рисунку 1. Необработанные изображения из ImageStream ^X Mark II (файлы RIF, тип модифицированного 16-битного файла TIFF) были компенсированы (применены побочные и другие исправления), фон был вычтен, а функции были рассчитаны с использованием программного обеспечения IDEAS 6.2 (Amnis Millipore, бесплатно для загрузки после создания учетной записи пользователя Amnis). созданный). Полученные файлы компенсированных изображений (файлы CIF) использовались для количественной оценки характеристик всех клеток и образцов. Дополнительные файлы 1 и 2 сообщают список функций, используемых для каждого организма и для каждого эксперимента, и их описание. Затем эти матрицы признаков для каждого объекта (файлы DAF) были экспортированы из IDEAS в файлы FCS. Экспортированные файлы FCS обрабатывались в R (R Development Core Team, 2014). Чтобы отсечь избыточные признаки, которые вносят шум, но мало новой информации, значения корреляции Спирмена для каждой пары признаков были рассчитаны с использованием всех событий репрезентативной выборки, и один из признаков пары был обрезан, когда корреляция между ними была ≥0,85 ( Рисунок 2—дополнение к рисунку 1; Caicedo et al., 2017). Корреляция Спирмена средних значений оставшихся признаков для каждой выборки затем использовалась для выявления выбросов среди повторений выборки. Образцы с корреляцией средних значений признаков ниже 0,85 с набором отбраковывались (рис. 2 — дополнение к рисунку 2, рис. 3 — дополнение к рисунку 1, рис. 4 — дополнение к рисунку 1, рис. 5 — дополнение к рисунку 1), хотя в целом повторы были последовательный. Кроме того, в то время как морфологические признаки не требовали какого-либо преобразования или нормализации, признаки интенсивности флуоресценции были преобразованы с использованием функций AssessmentLogicle() и transform() из пакета R flowCore (Ellis et al. , 2018; Hahne et al., 2009).) для улучшения гомоскедастичности (однородности дисперсии) распределений. Характеристики интенсивности ДНК также были нормализованы для выравнивания положений всех пиков 2N и 4N и устранения дрейфа интенсивности между образцами (рис. 2 — дополнение к рисунку 3) с использованием функции gaussNorm() из пакета flowStats (Hahne et al., 2018). Обработанные данные были экспортированы из R (R Development Core Team, 2014) с использованием функции writeflowSet() в пакете flowCore (Ellis et al., 2018; Hahne et al., 2009) в виде файлов CSV или FCS, в зависимости от последующих потребностей в вывод файла.
Затем эти обработанные файлы данных были импортированы в среду кластеризации VorteX для кластеризации с использованием k-ближайших соседей X-Shift (устанавливается бесплатно) (Samusik et al., 2016). X-Shift был выбран в качестве метода кластеризации для Image3C на основе ранее опубликованного анализа и сравнения методов кластеризации (Weber and Robinson, 2016). Из этой работы мы определили, что X-сдвиг представляет собой оптимальный компромисс: идентификация низкочастотных популяций, точная идентификация «истинных» кластеров (, т.е. , баллы F1), не требующие для априорных знаний о количестве кластеров (популяций) и имеющие разумное время выполнения (из-за аппаратных требований к ЦП). Мы также провели раннее сравнение X-сдвига с K-средними (данные не показаны) и определили, что K-средних недостаточно для наших целей, поскольку известные клеточные популяции не были хорошо представлены кластерами, и мы не хотели указывать количество ожидаемых кластеров во входные параметры метода, поскольку это не будет известно при экспериментальном использовании. Во время импорта в VorteX все функции были масштабированы до 1 SD, чтобы уравнять вклад функций в кластеризацию. Кластеризация выполнялась в VorteX, проверяя диапазон значений k (обычно от 5 до 150), выбирая окончательное значение k с помощью функции «найти точку изгиба для номера кластера» в VorteX и визуально подтверждая, что чрезмерной или недостаточной кластеризации не произошло. Графики FDL подмножества ячеек, полученных из каждого набора образцов, также были сгенерированы в VorteX, и координаты ячеек в результирующем 2D-пространстве были экспортированы вместе с представлением графа FDL в graphML. Наконец, табличные данные (файлы CSV) были экспортированы из VorteX, включая основную таблицу каждого события клетки с его назначением кластера и исходным идентификатором образца, а также таблицу средних значений признаков для каждого кластера и количество клеток на кластер и на образец.
Результаты кластеризации были дополнительно проанализированы и нанесены на график в R (R Development Core Team, 2014) путем объединения всех событий ячеек и значений признаков с назначениями кластеров и координатами X/Y для графика FDL. Используя эти объединенные данные и файл graphML, экспортированный из VorteX, были созданы новые графики FDL для каждого состояния лечения с использованием пакета igraph (Csardi and Nepusz, 2006) в R (R Development Core Team, 2014). Статистический анализ различий в количестве клеток на кластер по состоянию выполнялся с использованием отрицательной биномиальной регрессии количества клеток на кластер, были созданы графики статистических результатов и других результатов, а также файлы CSV, содержащие идентификатор ячейки, идентификатор образца, значения признаков и X/Y. координаты в графе FDL были экспортированы для каждого образца. Последующее использование FCS Express Plus версии 6 (программное обеспечение DeNovo, бесплатная альтернатива упоминается далее в тексте) позволило визуализировать изображения клеток с использованием файлов DAF/CIF по кластерам и настраиваемым подмножествам графиков FDL.
Файлы DAF были открыты в программном обеспечении FCS Express Plus, и функция преобразования «R добавить параметры» с пользовательским сценарием использовалась для объединения данных кластеризации, сохраненных в файлах CSV, созданных выше, с файлами DAF и CIF (значения функций и изображение комплекты соответственно). На этом этапе работы использовалась FCS Express Plus, поскольку это единственная доступная в настоящее время платформа, которая работает с файлами Amnis DAF и CIF, а также запускает процессы преобразования, управляемые сценариями R. ImageJ Bio-Formats позволяет читать изображения из файлов DAF и CIF, но мы получили пиксели со значением намного выше, чем ожидалось, вероятно, из-за ошибки, которая еще не исправлена. Это позволило визуализировать галереи изображений клеток в каждом кластере и воротах по интересующим функциям на 2D-графиках (более традиционный анализ проточной цитометрии) для изучения результатов кластеризации и выявления интересующих кластеров и популяций. FCS Express Plus — это проприетарное программное обеспечение, но аналогичные результаты можно получить с помощью программного обеспечения IDEAS, где можно импортировать текстовый файл с идентификаторами кластеров для каждого события изображения, а информацию кластера можно сопоставить с изображениями событий.
Полный набор используемых пакетов R включает flowCore (Ellis et al., 2018; Hahne et al., 2009), flowStats (Hahne et al., 2018), igraph (Csardi and Nepusz, 2006), ggcyto (Jiang, 2015), ggridges (Wilke, 2018), ggplot2 (Wickham, 2016), stringr (Wickham, 2010), hmisc (Harrell and Dupont, 2019) и Caret (Kuhn, 2008). Рисунок 1 — дополнение к рисунку 1 можно использовать в качестве интерактивной карты пайплайна Image3C, где при нажатии на разные части пайплайна пользователи будут автоматически перенаправлены в соответствующие разделы нашего репозитория GitHub. Репозиторий GitHub по адресу https://github.com/stowersinstitute/LIBPB-139.0-Image3C предоставляет подробное описание всех этих этапов обработки и включает образцы сценариев, файлы рабочего процесса, а также примеры наборов данных и учебных пособий.
Настройка и использование классификатора CNN
Запросить подробный протокол
После того, как кластеры были определены с помощью ранее описанного кластерного анализа de novo , мы использовали CNN (LeCun et al., 1989), основанную на архитектуре DenseNet (Huang et al., 2017), для классификации изображений. Из всех событий, захваченных с помощью ImageStream ^X Mark II, мы выбрали только одиночные ядерные объекты, применяя гейты к графику отношения площади к соотношению сторон и графику интенсивности Draq5 для достижения этого выбора, соответственно. Для этих объектов мы экспортировали 16-битные изображения TIFF (один канал на «цвет» изображения флуоресценции/BF) с использованием программного обеспечения IDEAS 6. 2.
Поскольку изображения из системы ImageStream ^X Mark II имеют неоднородные размеры, каждое изображение было обрезано или дополнено до размера 32 × 32 пикселя с помощью индексации NumPy (van der Walt et al., 2011) в скрипте Python. CNN состоит из трех плотных блоков, которые переходят от трехканального ввода изображения 32 × 32 × 3 к конечному размеру 4 × 4 × 87 с 87 картами признаков. Плотный блок включает в себя три сверточных слоя, за каждым из которых следует неплотная активация ReLU. Последним шагом блока является пошаговая свертка, используемая для уменьшения ширины и высоты карт объектов в 2 раза. Последний слой CNN сглаживает массив 4 × 4 × 87 в одномерный вектор длиной 139.2 и полностью связан с выходным слоем, то есть одномерным вектором длиной в количество классов для предсказания. CNN использовала кросс-энтропию softmax для функции потерь с регуляризацией L2, а оптимизатор Адама (Kingma and Ba, 2014) использовался для минимизации функции потерь. CNN была реализована на Python с использованием платформы TensorFlow (Abadi et al. , 2015) и экосистемы SciPy (Oliphant, 2006; Oliphant, 2007; Pedregosa et al., 2011).
CNN использовалась для обучения классификатора с использованием более 35 000 изображений Типы клеток гемолимфы P. canaliculata в состоянии гомеостаза, полученные с помощью системы ImageStream ^X Mark II. Изображения событий были случайным образом разделены на 80 % для обучения, 10 % для тестирования во время обучения и 10 % для окончательной проверки. Первые 80% изображений использовались вместе с их идентификаторами кластеров, полученными кластеризацией de novo , для обучения классификатора. Скорость обучения для оптимизатора Адама была установлена на 0,0006 с затухающей скоростью обучения, начинающейся с 0,001 и уменьшающейся на 1% на каждом шаге. Обучение продолжалось 25 000 итераций с размером 256 случайно выбранных изображений для каждой итерации. После каждой итерации 10% ячеек исходных Набор данных P. canaliculata использовался для тестирования классификатора. Потери и точность CNN записывались после каждых 100 итераций для контроля производительности. Потери CNN определялись softmax перекрестной энтропии (Dahal, 2017) между конечным выходом и метками изображений с горячим кодированием. Чтобы CNN не запоминала тренировочный набор, к весам применялась регуляризация L2. Обучающий и тестовый наборы следуют одной и той же тенденции точности и потерь на всех итерациях, что указывает на то, что обучающий набор не запоминается и может обобщаться для прогнозирования тестового набора.
Окончательно обученный классификатор был протестирован на оставшихся 10% совершенно новых для CNN изображений. Обученная модель была сохранена для использования в будущем, поэтому сеть может использовать новые изображения для прогнозирования типов клеток. Вывод выполняется очень быстро, потому что через сеть выполняется только один прямой проход, а обратное распространение не происходит. Результатом вывода является вектор, длина которого равна количеству классов типов ячеек. Каждый элемент вектора будет вероятностью принадлежности клетки к соответствующему классу; сумма векторов должна быть равна 1. Вывод о завершении эксперимента даст вектор вероятности для каждого изображения; список векторов вероятностей можно сохранить в виде файла CSV. Для новых изображений необходимо будет изучить результаты вывода, чтобы убедиться, что прогнозы надежны. Подавляющее большинство векторов вероятности должно иметь максимальное значение больше 0,5, а подмножество изображений должно быть визуально проверено, чтобы проверить правильность присвоения класса.
Интерактивная карта конвейера Image3C (Рисунок 1 — дополнение к рисунку 1) включает также обучение и использование CNN. Репозиторий GitHub по адресу https://github.com/stowersinstitute/LIBPB-1390-Image3C содержит подробное описание всех этих этапов обработки, включает примеры сценариев, файлы рабочих процессов, а также примеры наборов данных и руководств. правая часть интерактивной карты Image3C (рис. 1 — дополнение к рис. 1).
Статистический анализ
Запросить подробный протокол
Отрицательная биномиальная регрессия была выполнена для таблиц количества клеток на кластер и на образец, а графики были созданы с использованием R (R Development Core Team, 2014) с пакетом edgeR (Robinson et al., 2010), который был разработан для RNA-seq. анализ, но включает в себя общеприменимые и удобные оболочки для регрессии, анализа моделирования и построения графиков результатов. Для сравнения состава клеточной гемолимфы самок и самцов P. canaliculata, использовали однофакторный ANOVA с последующим FDR (Benjamini-Hochberg, поправка на множественное тестирование).
Доступность данных
Все исходные данные, лежащие в основе этой рукописи, доступны в репозитории исходных данных Stowers по адресу http://www.stowers.org/research/publications/libpb-1390. Код и описание Image3C находятся в свободном доступе в репозитории GitHub https://github.com/stowersinstitute/LIBPB-1390-Image3C.
Ссылки
Препринт
Абади М
Агарвал А
Бархэм П
Бревдо Е
Чен Z
(2015) Tensorflow: крупномасштабное машинное обучение в гетерогенных распределенных системах
arXiv.
https://arxiv.org/abs/1603.04467
Google ученый
Аккорси А
Буччи L
де Эгилер М
Оттавиани E
Малаголи Д
(2013) Сравнительный анализ циркулирующих гемоцитов пресноводной улитки Pomacea canaliculata
Иммунология рыбы и моллюсков 34 :1260–1268.
https://doi.org/10.1016/j.fsi.2013.02.008
Google ученый
Барон CS
Барве А
Мураро MJ
Ван дер Линден Р
Дхармадхикари G
Любимова А
де Конинг EJP
ван Ауденарден A
(2019) Очистка типов клеток с помощью сортировки, обученной транскриптому одиночных клеток
Клетка 179 :527–542.
https://doi.org/10.1016/j.cell.2019.08.006
Google ученый
Блази Т
Хенниг Х
Саммерс HD
Тайс FJ
Червейра J
Паттерсон Джо
Дэвис Д
Филби А
Плотник AE
Рис П
(2016) Анализ клеточного цикла без меток для высокопроизводительной проточной цитометрии с визуализацией
Nature Communications 7 :10256.
https://doi.org/10.1038/ncomms10256
Google ученый
Программное обеспечение
Коробка А
(2021) Пошаговые инструкции по запуску анализа Image3C, версия 637074e
GitHub.
https://github.com/stowersinstitute/LIBPB-1390-Image3C
Кайседо JC
Купер С
Хайгвер F
Уорчал S
Цю П
Молнар С
Василевич А.С.
Барри JD
Бансал HS
Краус О
Вавер М
Пааволайнен Л
Херрманн MD
Робан М
Хунг Дж
Хенниг Х
Конканнон J
Смит I
Клемонс Пенсильвания
Сингх С
Рис П
Хорват П
Линингтон RG
Плотник AE
(2017) Стратегии анализа данных для профилирования клеток на основе изображений
Nature Methods 14 :849–863.
https://doi.org/10.1038/nmeth.4397
Google ученый
Ченг С
Фу С
Ким Ю.М.
Песня W
Ли Ю
Сюэ Ю
Йи Дж
Тянь Л
(2021) Цитометрия отдельных клеток с помощью предсказания мультиплексной флуоресценции с помощью отражательной микроскопии без меток
Научные достижения 7 :eabe0431.
https://doi.org/10.1126/sciadv.abe0431
Google ученый
Чарди Г
Непуш Т
(2006)
Пакет программ igraph для сложных сетевых исследований
InterJournal, Complex Systems 1695 :1–9.
Google ученый
Куэто JA
Родригес C
Вега ИА
Кастро-Васкес A
(2015) Иммунная защита инвазивной яблонной улитки Pomacea canaliculata (Caenogastropoda, Ampullariidae): фагоцитирующие гемоциты в кровотоке и почках
PLOS ONE 10 :e0123964.
https://doi.org/10.1371/journal.pone.0123964
пабмед
Google ученый
Программное обеспечение
Дахал П
(2017) Перекрестная энтропия Softmax
Deepnotes.
https://deepnotes.io/softmax-crossentropy
Программное обеспечение
Эллис Б
Хааланд П
Хане F
Ле Мёр N
Гопалакришнан N
Спидлен J
Цзян М
(2018) flowCore: flowCore: Базовые структуры для данных проточной цитометрии, версия 1.46.1
R package.
https://rdrr.io/bioc/flowCore/
Эйленберг П
Келер N
Блази Т
Филби А
Плотник АЕ
Рис П
Тайс FJ
Волк FA
(2017) Реконструкция клеточного цикла и прогрессирования заболевания с помощью глубокого обучения
Nature Communications 8 :463.
https://doi.org/10.1038/s41467-017-00623-3
пабмед
Google ученый
Гулам М
Скиалдоне А
Грэм SJL
Маколей IC
Джедрусик А
Гупаловская А
Воет Т
Мариони JC
Зерницка-Гетц М
(2016) Гетерогенность в мишенях Oct4 и Sox2 искажает судьбу клеток у эмбрионов 4-клеточных мышей
Клетка 165 :61–74.
https://doi. org/10.1016/j.cell.2016.01.047
пабмед
Google ученый
Хане F
ЛеМёр N
Бринкман RR
Эллис Б
Хааланд П
Саркар Д
Спидлен J
Штамм Е
Джентльмен R
(2009) flowCore: пакет биопроводников для высокопроизводительной проточной цитометрии
BMC Bioinformatics 10 :106.
https://doi.org/10.1186/1471-2105-10-106
пабмед
Google ученый
Программное обеспечение
Хане F
Гопалакришнан N
Ходабахши AH
Вонг С
Ли К
(2018) flowStats: Статистические методы анализа данных проточной цитометрии, версия 3. 38.0
Пакет R.
https://rdrr.io/bioc/flowStats/
Программное обеспечение
Харрелл FE
Дюпон С
(2019) Hmisc: Разное Harrell, версия 4.5-0
Github.
https://github.com/harrelfe/Hmisc/
Хенниг Х
Рис П
Блази Т
Каменский Л
Хунг Дж
Дао Д
Плотник AE
Филби А
(2017) Решение с открытым исходным кодом для расширенного анализа данных проточной цитометрии изображений с использованием машинного обучения
Методы 112 :201–210.
https://doi.org/10.1016/j.ymeth.2016.08.018
Google ученый
Конференц-связь
Хуан Г
Лю Z
Маатен Л
Вайнбергер KQ
(2017)
Плотно связанные сверточные сети
Доклад, представленный на конференции IEEE 2017 года по компьютерному зрению и распознаванию образов (CVPR). стр. 21–26.
Google ученый
Программное обеспечение
Цзян М
(2015) ggcyto: Визуализация данных цитометрии с помощью ggplot, версия 1. 8.0
Гитхаб.
https://github.com/RGLab/ggcyto
Качоровски KJ
Шекхар К
Нкуликиимфура D
Деккер CL
Меккер H
Дэвис ММ
Чакраборти АК
Бродин П
(2017) Непрерывные иммунотипы описывают иммунные вариации человека и предсказывают разнообразные ответы
PNAS 114 :E6097–E6106.
https://doi.org/10.1073/pnas.1705065114
пабмед
Google ученый
Киммел JC
Пенленд Л
Рубинштейн ND
Хендриксон ДГ
Келли DR
Розенталь AZ
(2019) Секвенирование РНК одиночных клеток мышей выявляет траектории старения, специфичные для клеток и тканей
Исследование генома 29 :2088–2103.
https://doi.org/10.1101/gr.253880.119
Google ученый
Препринт
Кингма ДП
Ба J
(2014) Адам: метод стохастической оптимизации
архив.
https://arxiv.org/abs/1412.6980
Google ученый
Кобаяши H
Лей С
Ву Ю
Мао А
Цзян И
Го Б
Озеки Y
Года К
(2017) Обнаружение реакции клеток на лекарственные препараты без использования меток с помощью высокопроизводительной визуализации в светлом поле и машинного обучения
Scientific Reports 7 :12454.
https://doi.org/10.1038/s41598-017-12378-4
Google ученый
Кун М
(2008) Построение прогностических моделей в R с использованием пакета Caret
Journal of Statistical Software 28 :1–26.
https://doi.org/10.18637/jss.v028.i05
Google ученый
Лекун Y
Бозер Б
Денкер JS
Хендерсон Д
Ховард RE
Хаббард W
Куртка LD
(1989) Обратное распространение применяется к распознаванию рукописного почтового индекса
Нейронные вычисления 1 :541–551.
https://doi.org/10.1162/neco.1989.1.4.541
Google ученый
Лей С
Кобаяши H
Ву Ю
Ли М
Исодзаки А
Ясумото А
Миками Х
Ито Т
Нитта Н
Сугимура Т
Ямада М
Ятоми Y
Ди Карло D
Озеки Y
Года К
(2018) Высокопроизводительная проточная цитометрия с визуализацией с помощью оптофлюидной микроскопии с растяжением во времени
Nature Protocols 13 :1603–1631.
https://doi.org/10.1038/s41596-018-0008-7
пабмед
Google ученый
Ли Дж
Барреда DR
Чжан Ю.А.
Бошра H
Гельман АЕ
Лапатра S
Торт L
Саньер Джо
(2006) В-лимфоциты ранних позвоночных обладают мощными фагоцитарными и микробицидными способностями
Nature Immunology 7 :1116–1124.
https://doi.org/10.1038/ni1389
пабмед
Google ученый
Липпевельд М
Книл C
Лэдлоу E
Фуллер А
Михаэлис ЖЖ
Сайс Y
Филби А
Перальта D
(2020) Классификация лейкоцитов человека с использованием машинного обучения для проточной цитометрии без окрашивания
Цитометрия, часть A 97 :308–319.
https://doi.org/10.1002/cyto.a.23920
Google ученый
Луго-Вилларино G
Балла КМ
Стачура DL
Бануэлос К
Вернек МБ
Травер Д
(2010) Идентификация дендритных антигенпрезентирующих клеток у рыбок данио
PNAS 107 :15850–15855.
https://doi.org/10.1073/pnas.10004
пабмед
Google ученый
Майзелс
ринггитов
Насси DH
(2013) В дикую природу: копаем эволюционные корни иммунологии
Nature Immunology 14 :879–883.
https://doi.org/10.1038/ni.2643
пабмед
Google ученый
Нассар М
Доан М
Филби А
Волькенхауэр О
Фогг ДК
Пясецка J
Торнтон Калифорния
Плотник AE
Саммерс HD
Рис П
Хенниг Х
(2019) Безэтикеточная идентификация лейкоцитов с помощью машинного обучения
Цитометрия Часть A 95 :836–842.
https://doi.org/10.1002/cyto.a.23794
Google ученый
Нитта Н
Сугимура Т
Исодзаки А
Миками Х
Хираки К
Сакума С
Иино Т
Араи F
Эндо Т
Фудзиваки Y
Фукудзава Х
Хасэ М
Хаякава Т
Хирамацу К
Хосино Y
Инаба М
Ито Т
Каракава H
Касаи Y
Коидзуми К
Ли С
Лей С
Ли М
Маэно Т
Мацусака С
Мураками Д
Накагава А
Огучи Ю
Ойкава М
Ота Т
Шиба К
Синтаку H
Ширасаки Y
Шуга К
Сузуки Y
Сузуки Н
Танака Y
Тэдзука Х
Тоёкава C
Яликун Ю
Ямада М
Ямагиши М
Ямано Т
Ясумото А
Ятоми Y
Ядзава М
Ди Карло D
Хосокава Y
Уэмура С
Озеки Y
Года К
(2018) Интеллектуальная сортировка клеток, активируемая изображением
Сотовый 175 :266–276.
https://doi.org/10.1016/j.cell.2018.08.028
пабмед
Google ученый
Книга
Олифант ТЕ
(2006)
Руководство по NumPy
Массачусетский технологический институт.
Google ученый
Олифант ТЕ
(2007) Python для научных вычислений
Вычисления в науке и технике 9 :10–20.
https://doi.org/10.1109/MCSE.2007.58
Google ученый
Страница DM
Виттамер V
Бертран JY
Льюис КЛ
Пратт ДН
Дельгадо N
Шейл SE
МакГью С
Якобсен BH
Доти А
Пао Y
Ян Х
Чи NC
Магор БГ
Травер Д
(2013) Эволюционно законсервированная программа развития и активации В-клеток у рыбок данио
Кровь 122 :e1–e11.
https://doi.org/10.1182/blood-2012-12-471029
пабмед
Google ученый
Палич Д
Андреасен CB
Остойич J
Скажи 9 ринггитов0099
Рот JA
(2007) Рыбы данио ( Danio rerio ) анализ целой почки для измерения высвобождения нейтрофильных внеклеточных ловушек и дегрануляции первичных гранул
Journal of Immunological Methods 319 :87–97.
https://doi.org/10.1016/j.jim.2006.11.003
пабмед
Google ученый
Педрегоса F
Вароко G
Грамфорт А
Мишель V
Тирион Б
Гризель О
Блондель М
(2011)
Scikit-learn: машинное обучение в Python
Journal of Machine Learning Research 12 :2825–2830.
Google ученый
Пепе-Муни BJ
Укроп МТ
Алеманы А
Ордовас-Монтанес J
Мацусита Y
Рао А
Сен А
Миядзаки М
Анакк S
Доусон Пенсильвания
Оно N
Шалек АК
ван Ауденарден А
Камарго ФД
(2019) Одноклеточный анализ эпителия печени выявляет динамическую гетерогенность и существенную роль YAP в гомеостазе и регенерации
Клетка Стволовая клетка 25 :23–38.
https://doi.org/10.1016/j.stem.2019.04.004
пабмед
Google ученый
Peus R
Коробка AC
Чен С
Ван И
Цутия Д
Лица JL
Кензиор А
Мальдонадо E
Кришнан Дж
Шарсак JP
Убой BD
Ронер N
(2020) Адаптация к низкой численности паразитов влияет на иммунный вклад и иммунопатологические реакции пещерных рыб
Nature Ecology & Evolution 4 :1416–1430.
https://doi.org/10.1038/s41559-020-1234-2
пабмед
Google ученый
Филиппеос C
Телерман СБ
Улес B
Писко АО
Шоу TJ
Эльгета Р
Ломбарди G
Дрискелл RR
Солдин М
Линч MD
Ватт FM
(2018) Пространственное и одноклеточное профилирование транскрипции идентифицирует функционально различные субпопуляции дермальных фибробластов человека
Journal of Investigative Dermatology 138 :811–825.
https://doi.org/10.1016/j.jid.2018.01.016
Google ученый
Программное обеспечение
Основная группа разработки R
(2014) R: Язык и среда для статистических вычислений, версия 2.6.2
R Foundation for Statistical Computing, Вена, Австрия.
http://www.R-project.org/
Рабинович М
(1995) Профессиональные и непрофессиональные фагоциты: введение
Тенденции клеточной биологии 5 :85–87.
https://doi.org/10.1016/S0962-8924(00)88955-2
пабмед
Google ученый
Робинсон MD
Маккарти DJ
Смит ГК
(2010) edgeR: пакет биопроводников для дифференциального анализа данных экспрессии цифровых генов
Биоинформатика 26 :139–140.
https://doi.org/10.1093/биоинформатика/btp616
пабмед
Google ученый
Самусик N
Добрый Z
Спитцер MH
Дэвис KL
Нолан GP
(2016) Автоматическое картирование пространства фенотипов с данными по отдельным клеткам
Природные методы 13 :493–496.
https://doi.org/10.1038/nmeth.3863
пабмед
Google ученый
Сузуки Y
Кобаяши К
Вакисака Y
Дэн Д
Танака С
Хуан CJ
Лей С
Солнце CW
Лю Х
Фудзиваки Y
Ли С
Исодзаки А
Касаи Y
Хаякава Т
Сакума С
Араи F
Коидзуми К
Тэдзука Х
Инаба М
Хираки К
Ито Т
Хасэ М
Мацусака С
Шиба К
Шуга К
Нисикава М
Джона М
Ятоми Y
Яликун Ю
Танака Y
Сугимура Т
Нитта Н
Года К
Озеки Y
(2019) Безметочная химическая визуализирующая проточная цитометрия с помощью высокоскоростного многоцветного стимулированного комбинационного рассеяния
PNAS 116 :15842–15848.
https://doi.org/10.1073/pnas.1
2116
пабмед
Google ученый
Тирош I
Изар Б
Пракадан СМ
Уодсворт MH
Трейси Д
Тромбетта JJ
Ротем А
Родман С
Лиан С
Мерфи Г
Фаллахи-Сичани М
Даттон-Регестер К
Лин младший
Коэн О
Шах П
Лу Д
Генвал AS
Хьюз ТК
Циглер CG
Казер SW
Гайяр А
Колб КЕ
Виллани AC
Йоханнессен CM
Андреев А. Ю.
Ван Аллен EM
Бертаньолли М
Зоргер ПК
Салливан RJ
Флаэрти КТ
Фредерик ДТ
Жане-Вальбуэна J
Юн CH
Розенблатт-Розен O
Шалек АК
Регев А
Гаррауэй Л.А.
(2016) Анализ многоклеточной экосистемы метастатической меланомы с помощью секвенирования одноклеточной РНК
Science 352 :189–196.
https://doi.org/10.1126/science.aad0501
пабмед
Google ученый
Травер Д
Лапа BH
Посс КД
Пенберти WT
Лин С
Зон Л. И.
(2003) Трансплантация и визуализация in vivo многолинейного приживления у бескровных мутантов рыбок данио
Nature Immunology 4 :1238–1246.
https://doi.org/10.1038/ni1007
пабмед
Google ученый
Ван дер Меер W
Скотт CS
де Кейзер MH
(2004) Автоматическая пометка влияет на несоответствие и погрешность палочкоядерных и атипичных морфологических различий лимфоцитов
Клиническая химия и лабораторная медицина 42 :371–377.
https://doi. org/10.1515/CCLM.2004.066
пабмед
Google ученый
Ван дер Вальт S
Кольбер СК
Вароко G
(2011) Массив NumPy: структура для эффективных числовых вычислений
Вычисления в науке и технике 13 : 22–30.
https://doi.org/10.1109/MCSE.2011.37
Google ученый
Уолтерс DR
(1970) Гемоциты сатурниидных тутовых шелкопрядов: их поведение in vivo и in vitro в ответ на диапаузу, развитие и повреждение
Journal of Experimental Zoology 174 :441–450.
https://doi.org/10.1002/jez.1401740407
Google ученый
Вебер ЛМ
Робинсон MD
(2016) Сравнение методов кластеризации данных высокоразмерной проточной и массовой цитометрии одиночных клеток
Цитометрия, часть A 89 :1084–1096.
https://doi.org/10.1002/cyto.a.23030
Google ученый
Уикхем Х
(2010) stringr: современная последовательная обработка строк
The R Journal 2 : 38–40.
https://doi.org/10.32614/RJ-2010-012
Google ученый
Книга
Уикхем Х
(2016) Ggplot2: элегантная графика для анализа данных
Springer-Verlag.
https://doi.org/10.1007/978-0-387-98141-3
Google ученый
Программное обеспечение
Уилке СО
(2018) ggridges, Графики Ridgeline в «ggplot2», версия 0.5.1
Github.
https://github.com/clauswilke/ggridges
Виттамер V
Бертран JY
Гутчов PW
Травер Д
(2011) Характеристика системы мононуклеарных фагоцитов у рыбок данио
Кровь 117 :7126–7135.
https://doi.org/10.1182/blood-2010-11-321448
пабмед
Google ученый
Якимов БП
Гоголева М.А.
Семенов А.Н.
Родионов С.А.
Новоселова М.В.
Гайер АВ
Ковалев А.В.
Бернакевич АИ
Фадеев В.В.
Армаганов А.Г.
Драчев В.П.
Горин Д.А.
Дарвин ME
Щеславский В. И.
Будылин ГС
Приезжев А.В.
Ширшин Е.А.
(2019) Немаркированная характеристика лейкоцитов с использованием флуоресцентной визуализации и проточной цитометрии: молекулярная гетерогенность и эритрофагоцитоз [приглашен]
Биомедицинская оптика Экспресс 10 :4220–4236.
https://doi.org/10.1364/BOE.10.004220
пабмед
Google ученый
Письмо-решение
Благодарим вас за представление статьи «Image3C: мультимодальный интегративный метод анализа отдельных клеток на основе изображений и независимых меток» на рассмотрение eLife …. Ваша статья была проверена двумя рецензентами, один из которых является членом нашего Совета редакторов-рецензентов, а оценка проводилась под контролем Дидье Штенье в качестве старшего редактора.
Оба рецензента согласились с тем, что представленная вами рукопись является ценным вкладом в область немаркированной оценки сложных клеточных смесей и должна быть опубликована с учетом некоторых важных изменений.
Рецензенты обсудили свои обзоры друг с другом, и редактор-рецензент составил его, чтобы помочь вам подготовить исправленное представление.
Существенные изменения:
1) Сравните и сопоставьте Image3C с другими подходами к фенотипированию без меток, вопрос, поднятый всеми рецензентами.
2) Сделать программу более доступной для обычного пользователя.
3) Пожалуйста, ответьте на опасения по поводу того, что назначение поста CNN является «неконтролируемым», которое было поднято обоими рецензентами.
4) Обратитесь к другим параметрам задач рабочего процесса Image3C (например, извлечение признаков, обработка изображений, кластеризация и т. д.). – Как минимум, объясните выбор более критично
Кроме того, просьба обращаться к дальнейшим комментариям ниже и при необходимости исправлять/уточнять цифры (см. комментарии)
Рецензент №1 (рекомендации для авторов):
должны быть направлены на то, чтобы сделать программное обеспечение доступным для обычных пользователей. На странице github есть несколько упоминаний «If on site at SIMR» (которые, как я полагаю, относятся к Институту медицинских исследований Стоуэра), что не внушало уверенности в том, что этот инструмент предназначен для использования широкой аудиторией.
– Могут ли авторы сравнить и прояснить вклад Image3C по сравнению с другими системами фенотипирования одиночных клеток без меток?
— Поскольку на каждом этапе конвейера существует множество вариантов алгоритмов, таких как извлечение признаков, обработка изображений, кластеризация и т. д. Провели ли авторы сравнение нескольких разумных методов, чтобы показать, что их выбор является наиболее подходящим? Как минимум, авторы должны более критично объяснить свой выбор.
Reviewer #2 (рекомендации для авторов):
Авторы представляют убедительный аргумент в пользу использования данных визуализации проточного цитометра для профилирования и сравнения сложных смесей клеток, таких как диссоциированные ткани. Я особенно оценил применение Image3C для разделения наборов данных от рыб ( D. rerio WKM) и немодельной системы (Гемолимфа яблочной улитки): они не только демонстрируют устойчивую кластеризацию, но и появление фагоцитов при заражении. . Я понимаю, что Image3C применим не только без множества установленных реагентов, но и может добавить дополнительный слой, основанный на морфологии клеток, а не на чистой транскриптомике (или доступности генома) — эти слои информации могут дополнять друг друга, что я и предлагаю авторы подчеркивают.
Код в основном доступен (за исключением шагов с использованием проприетарного программного обеспечения), что хорошо. Однако я считаю, что в настоящее время код слишком разрозненный, чтобы быть полезным для неспециалиста. Рабочий процесс в настоящее время включает шаги с использованием пакета Amnis IDEAS, за которыми следуют пользовательские сценарии в R, за которыми следует VorteX (я верю в Java), за которыми следуют дополнительные сценарии в R, за которыми следует необязательная классификация с использованием CNN в python, с побочной ветвью операций с использованием коммерческое программное обеспечение для проточной цитометрии (FCSexpress). Думаю, было бы целесообразно как-то упаковать это собрание скриптов в более доступный и удобный пакет. Например, пакеты с открытым исходным кодом, такие как FlowCore, могут быть интегрируемыми.
В том же духе, есть ли альтернативы зависимости от конкретного прибора (Amnis ImageStream Mark2) и проприетарного программного обеспечения IDEAS?
Как есть, я не смог протестировать пакеты из-за отсутствия данных по прибору, программного обеспечения.
Образцы данных также должны быть предоставлены вместе с тестируемым оптимизированным пакетом программного обеспечения.
Авторы недостаточно контекстуализировали опубликованную работу по извлечению информативных признаков изображения без меток. Они также не сравнивали производительность Image3C!
Авторы должны выделить и проиллюстрировать воспроизводимость данных в независимых наборах данных (при условии, что это так). После изучения материалов и методов я понял, что для каждого набора данных было создано несколько повторов. Об этом свидетельствуют дополнительные цифры.
Мне до сих пор не ясно, как именно идентификаторы типов ячеек были присвоены кластерам FDL. Насколько я понимаю, для назначения требовалось (было) много предварительных знаний (и соответствующих исследований). Таким образом, анализ с использованием Image3C может быть менее полезен для оценки сложности типов клеток, а скорее для их изменений. Утверждение о том, что «типы клеток идентифицируются кластеризацией de novo», должно быть смягчено.
Кроме того, заявление о том, что
«… это создает «машину» классификатора клеток на основе CNN, используемую для количественной оценки полученных впоследствии данных проточной цитометрии на основе изображений и для сравнения клеточного состава образцов в нескольких экспериментах, в высокопроизводительном и неконтролируемая манера…«
совершенно сбивает меня с толку. CNN использовала кластерные функции в качестве руководств по назначению. Я считаю, что это контролируется по определению».
Мне не удалось в достаточной мере оценить некоторые рисунки, в частности отображаемые массивы клеток в различных каналах. Во многих случаях уровни таковы, что сигнал, который я должен предположить, не виден. Это особенно верно для анализа фагоцитоза, где должны быть видны сигналы DHR и CTV. Также в этих случаях следует проводить прямое сравнение с ячейками сестринского кластера.
Проверьте этикетки (особенно на дополнительных рисунках) на ясность (например, «Single и Nuc» в S3?)
https://doi.org/10.7554/eLife.65372.sa1
Ответ автора
Основные версии:
1) Сравните и сопоставьте Image3C с другими подходами к фенотипированию без меток, вопрос, поднятый всеми рецензентами.
Мы включили в рукопись новую таблицу (Таблица 1), в которой мы сравниваем подходы к фенотипированию без меток и кластеризации клеток. Мы приняли во внимание, на каких образцах тестировался инструмент, необходимость предварительного знания образца и/или видовых реагентов на любой стадии процесса, а также необходимое аппаратное и программное обеспечение. Мы также дополнительно обсудили эти аспекты в основном тексте.
2) Программное обеспечение должно быть сделано более доступным для обычного пользователя.
Чтобы сделать наш инструмент более доступным, мы: (1) тщательно переработали файл readme на странице GitHub, сделав его более понятным и подробным; (2) добавлены обучающие видеоролики на страницу GitHub, чтобы показать, как использовать некоторые из упомянутых программ; (3) сохранил код R как страницу уценки, чтобы сделать ее более удобной для пользователя; (4) переименовали файлы примеров, которые можно использовать для тестирования нашего конвейера, чтобы сделать их более понятными; (5) сохранил код Python в более удобных для пользователя блокнотах Jupyter; и (6) преобразовал рисунок 1 — дополнение к рисунку 1 в интерактивную карту, на которой можно щелкнуть различные этапы конвейера Image3C и автоматически перенаправиться в соответствующий раздел нашей страницы репозитория GitHub.
3) Пожалуйста, ответьте на опасения по поводу того, что пост назначения CNN является «неконтролируемым», который был поднят обоими рецензентами.
Благодарим обоих рецензентов за указание на это и приносим извинения за ошибку. В тексте мы перефразировали все предложения, в которых CNN был ошибочно определен как «неконтролируемый».
4) Обратитесь к другим параметрам задач рабочего процесса Image3C (например, извлечение признаков, обработка изображений, кластеризация и т. д.). – Как минимум, объясните выбор более критично.
Мы благодарим рецензентов за этот комментарий. Мы не проводили параллельного сравнения нескольких методов для каждого этапа конвейера, но выбирали алгоритмы и программное обеспечение на основе опубликованной литературы, выполненных нами пилотных проектов и наличия вариантов в зависимости от поставленной задачи. Теперь мы включаем в Материалы и методы более подробное объяснение критериев, использованных для нашего выбора, и теперь мы упоминаем альтернативу FCS Express, которая является единственным используемым программным обеспечением, которое не является бесплатным или открытым исходным кодом.
Кроме того, просьба обращаться к дальнейшим комментариям ниже и при необходимости исправлять/уточнять цифры (см. комментарии).
Рецензент №1 (Рекомендации авторам):
— Учитывая, что это инструмент и справочный документ, я думаю, что следует уделить больше внимания тому, чтобы сделать программное обеспечение доступным для обычных пользователей. На странице github есть несколько упоминаний «If on site at SIMR» (которые, как я полагаю, относятся к Институту медицинских исследований Стоуэра), что не внушало уверенности в том, что этот инструмент предназначен для использования широкой аудиторией.
Мы полностью согласны с этим комментарием и приносим свои извинения за оплошность. Мы удалили все ссылки на SIMR и внесли ряд изменений, направленных на то, чтобы сделать конвейер более доступным. Мы: (1) тщательно переработали файл readme на странице GitHub, сделав его более ясным и подробным; (2) добавил обучающие видео на страницу GitHub, чтобы показать, как использовать некоторые ключевые программы, упомянутые в рукописи; (3) сохранил код R как страницу уценки, чтобы сделать ее более удобной для пользователя; (4) переименовали файлы примеров, которые можно использовать для тестирования нашего конвейера, чтобы сделать их более понятными; (5) сохранил код Python в более удобных для пользователя блокнотах Jupyter; (6) преобразовал рисунок 1-дополнение к рисунку 1 в интерактивную карту, на которой можно щелкнуть различные этапы конвейера Image3C и автоматически перенаправиться в соответствующий раздел нашей страницы репозитория GitHub.
– Могут ли авторы сравнить и прояснить вклад Image3C по сравнению с другими системами фенотипирования одиночных клеток на основе изображений без меток?
Мы включили в рукопись новую таблицу (таблица 1), в которой мы сравниваем подходы фенотипирования без меток и кластеризации клеток. Мы приняли во внимание, на каких образцах тестировался инструмент, необходимость предварительного знания образца и/или видовых реагентов на любой стадии процесса, а также необходимое аппаратное и программное обеспечение. Мы также обсуждаем эти аспекты в основном тексте.
— Поскольку на каждом этапе конвейера существует множество вариантов алгоритмов, таких как извлечение признаков, обработка изображений, кластеризация и т. д. Провели ли авторы сравнение нескольких разумных методов, чтобы показать, что их выбор является наиболее подходящим? Как минимум, авторы должны более критично объяснить свой выбор.
Мы не проводили параллельного сравнения нескольких методов для каждого шага конвейера, но выбирали алгоритмы и программное обеспечение на основе опубликованной литературы, выполненных нами пилотных проектов и наличия вариантов в зависимости от поставленной задачи. Теперь мы включаем в «Материалы и методы» более подробное объяснение нашего выбора и упоминаем альтернативу FCS Express, которая является единственным используемым программным обеспечением, которое не является бесплатным или открытым исходным кодом.
Рецензент №2 (Рекомендации авторам):
Авторы представляют убедительный аргумент в пользу использования данных проточного цитометра для получения изображений в профилировании и сравнении сложных смесей клеток, таких как диссоциированные ткани. Я особенно оценил применение Image3C для разделения наборов данных от рыб ( D. rerio WKM) и немодельной системы (Гемолимфа яблочной улитки): они не только демонстрируют устойчивую кластеризацию, но и появление фагоцитов при заражении. . Я понимаю, что Image3C применим не только без множества установленных реагентов, но и может добавить дополнительный слой, основанный на морфологии клеток, а не на чистой транскриптомике (или доступности генома) — эти слои информации могут дополнять друг друга, что я и предлагаю авторы подчеркивают.
Мы благодарим рецензента за этот комментарий. Мы подчеркнули этот момент во Введении и в Обсуждении, расширив сценарии, в которых Image3C может быть ценным ресурсом.
Код в основном доступен (за исключением шагов с использованием проприетарного программного обеспечения), что хорошо. Однако я считаю, что в настоящее время код слишком разрозненный, чтобы быть полезным для неспециалиста. Рабочий процесс в настоящее время включает шаги с использованием пакета Amnis IDEAS, за которыми следуют пользовательские сценарии в R, за которыми следует VorteX (я верю в Java), за которыми следуют дополнительные сценарии в R, за которыми следует необязательная классификация с использованием CNN в python, с побочной ветвью операций с использованием коммерческое программное обеспечение для проточной цитометрии (FCSexpress). Думаю, было бы целесообразно как-то упаковать это собрание скриптов в более доступный и удобный пакет. Например, пакеты с открытым исходным кодом, такие как FlowCore, могут быть интегрируемыми.
Чтобы сделать наш инструмент более доступным, мы: (1) тщательно переработали файл readme на странице GitHub, сделав его более понятным и подробным; (2) добавлены обучающие видеоролики на страницу GitHub, чтобы показать, как использовать некоторые из упомянутых программ; (3) сохранил код R как страницу уценки, чтобы сделать ее более удобной для пользователя; (4) переименовали файлы примеров, которые можно использовать для тестирования нашего конвейера, чтобы сделать их более понятными; (5) сохранил код Python в более удобных для пользователя блокнотах Jupyter; и (6) преобразование рисунка 1-дополнения к рисунку 1 в интерактивную карту, на которой можно щелкнуть различные этапы конвейера Image3C и автоматически перенаправляться в соответствующий раздел нашей страницы репозитория GitHub. Теперь мы включаем в Материалы и Методы объяснение нашего выбора программного обеспечения/алгоритмов и упоминаем альтернативу FCS Express, которая является единственным используемым программным обеспечением, которое не является бесплатным или открытым исходным кодом.
В том же духе, есть ли какие-либо альтернативы зависимости от конкретного прибора (Amnis ImageStream Mark2) и проприетарного программного обеспечения IDEAS? Как есть, я не смог протестировать пакеты из-за отсутствия данных для конкретных инструментов, программного обеспечения. Образцы данных также должны быть предоставлены вместе с тестируемым оптимизированным пакетом программного обеспечения.
Мы благодарим рецензента за этот комментарий. Мы загрузили на GitHub примерный набор данных, чтобы пользователи могли протестировать конвейер без необходимости собирать данные самостоятельно. Мы также загрузили файлы, сохраненные на промежуточных этапах анализа, чтобы пользователи могли протестировать шаги, следующие за программным обеспечением IDEAS. Как только пользователи будут готовы к проведению экспериментов и у них будет доступен поток изображений, программное обеспечение IDEAS можно будет загрузить бесплатно.
Авторы недостаточно контекстуализировали опубликованную работу по извлечению информативных признаков изображения без меток. Они также не сравнивали производительность Image3C!
Теперь мы включили в рукопись новую таблицу (таблица 1), в которой мы сравниваем подходы к фенотипированию без меток и кластеризации клеток. Мы приняли во внимание, на каких образцах тестировался инструмент, необходимость предварительного знания образца и/или видовых реагентов на любой стадии процесса, а также необходимое аппаратное и программное обеспечение. Мы также обсуждаем эти аспекты в основном тексте.
Что касается сравнения производительности, Image3C был разработан из-за отсутствия опубликованных инструментов, способных выполнять кластеризацию de novo без использования маркеров специфического типа клеток. Мы также включили в «Материалы и методы» обоснование выбора этих конкретных алгоритмов как части конвейера, а в «Обсуждении» мы теперь упоминаем, что истинная положительная частота, которую мы получаем после обучения CNN, сравнима с частотой, о которой сообщается в других обученных нейронные сети.
Авторы должны выделить и проиллюстрировать воспроизводимость данных в независимых наборах данных (при условии, что это так). После изучения материалов и методов я понял, что для каждого набора данных было создано несколько повторов. Об этом свидетельствуют дополнительные цифры.
Мы благодарим рецензента за упоминание аспектов репликации. Количество повторов на наборы данных указано в подписях к рисункам и в материалах и методах. Теперь мы включаем комментарии о воспроизводимости между повторами в Результаты и включаем 3 новых дополнительных рисунка, которые вместе с Рисунком 2 — дополнение к рисунку 2 иллюстрируют корреляцию между образцами и потенциальными выбросами (Рисунок 3 — дополнение к рисунку 1, Рисунок 4 — приложение к рисунку 1, а рис. 5 — приложение к рисунку 1).
Мне до сих пор не ясно, как именно идентификаторы типов ячеек были присвоены кластерам FDL. Насколько я понимаю, для назначения требовалось (было) много предварительных знаний (и соответствующих исследований). Таким образом, анализ с использованием Image3C может быть менее полезен для оценки сложности типов клеток, а скорее для их изменений. Утверждение о том, что «типы клеток идентифицируются кластеризацией de novo», должно быть смягчено.
Мы благодарим рецензента за указание на это. Мы полностью согласны с тем, что определение типов клеток является долгосрочной целью и что для ее достижения потребуются дополнительные эксперименты (например, функциональные анализы) и изучение опубликованной литературы. В тексте мы смягчили наши утверждения, подчеркнув возможность сравнения численности кластеров, но при этом дав понять, что только сочетание клеточных морфологий, клеточных функций и сравнение с данными, опубликованными для близкородственных организмов, позволит окончательно идентифицировать тип клеток.
Кроме того, заявление о том, что
«… это создает «машину» классификатора клеток на основе CNN, используемую для количественной оценки полученных впоследствии данных проточной цитометрии на основе изображений и для сравнения клеточного состава образцов в нескольких экспериментах с высокой пропускной способностью и без контроля…»
меня совершенно сбивает с толку. CNN использовала функции кластера в качестве руководств по назначению. Я считаю, что это контролируется по определению».
Мы благодарим рецензента за указание на это. Мы полностью согласны и убрали слово «без присмотра» из упомянутого предложения.
Мне не удалось в достаточной мере оценить некоторые рисунки, в частности отображаемые массивы клеток в различных каналах. Во многих случаях уровни таковы, что сигнал, который я должен предположить, не виден. Это особенно верно для анализа фагоцитоза, где должны быть видны сигналы DHR и CTV. Также в этих случаях следует проводить прямое сравнение с ячейками сестринского кластера.
Благодарим рецензента и приносим свои извинения за трудности, возникшие при оценке сигнала на изображениях клеток. К сожалению, FCS Express, программное обеспечение, которое мы использовали для объединения изображений клеток и их идентификаторов кластеров и создания галерей клеток (дополнительные файлы 4, 7, 8 и 11), использует информацию, полученную от IDEAS, и не позволяет регулировать отображение (интенсивность/яркость). /цвет) изображений. Мы согласны с тем, что цвет, используемый для бактериального сигнала, не обеспечивает наилучшего контраста с фоном, и приносим свои извинения за ограниченные возможности настройки характеристик изображения с помощью FCS Express. По предложению рецензента мы включили в рукопись новый дополнительный рисунок (рисунок 5 — дополнение к рисунку 4), показывающий желтым цветом сигнал бактерий, помеченных клеточным следом-виолеттом, и сравнивающий бок о бок профессиональные фагоциты и не- фагоцитирующие гемоциты яблочной улитки. Эти изображения были получены с использованием функции «Галерея» программного обеспечения Amnis IDEAS, и значение интенсивности сигнала указано в верхней части каждого отдельного изображения. Кроме того, теперь мы подчеркиваем в легендах рисунков 2, 3, 4 и 5, что представление ячеек, принадлежащих каждому кластеру, было показано в дополнительных файлах, где нет ограничения по размеру.
Проверьте этикетки (особенно на дополнительных рисунках) для ясности (например, «Single и Nuc» в S3?)
Мы проверили все метки на рисунках, дополнительных файлах и изменили те, которые могут быть непонятны читателям и пользователям, например метки на рисунке 2 — приложение 2 к рисунку (предыдущий рисунок S3) и дополнительный файл 3.
https://doi.org/10.7554/eLife.65372.sa2
Статья и информация об авторе
Сведения об авторе
Элис Аккорси
Институт медицинских исследований Стоуэрса, Канзас-Сити, США
Медицинский институт Говарда Хьюза, Институт медицинских исследований Стоуэрса, Канзас-Сити, США
Пожертвование
Концептуализация, Курирование данных, Формальный анализ, Надзор, Получение финансирования, Визуализация, Методология, Написание — первоначальный проект, Администрирование проекта, Написание — обзор и редактирование
Внесли равный вклад с
Эндрю Си Бокс и Роберт Пеус
Конкурирующие интересы
Конкурирующие интересы не заявлены «Этот ORCID iD идентифицирует автора этой статьи:» 0000-0003-0606-2977
Эндрю C Box
Институт медицинских исследований Стоуэрса, Канзас-Сити, США
Вклад
Концептуализация, Курирование данных, Формальный анализ, Исследование, Визуализация, Методология, Написание — обзор и редактирование
Внесли равный вклад с
Элис Аккорси и Роберт Пеус
Конкурирующие интересы
Конкурирующие интересы не заявлены
Robert Peuß
Институт медицинских исследований Stowers, Канзас-Сити, США
Институт эволюции и биоразнообразия Мюнстерского университета, Мюнстер, Германия
Пожертвование
Концептуализация, Курирование данных, Формальный анализ, Надзор, Получение финансирования, Визуализация, Методология, Написание — первоначальный проект, Администрирование проекта, Написание — обзор и редактирование
Внесли равный вклад с
Элис Аккорси и Эндрю Си Бокс
Конкурирующие интересы
Конкурирующие интересы не заявлены «Этот ORCID iD идентифицирует автора этой статьи:» 0000-0002-9716-6650
Кристофер Вуд
Институт медицинских исследований Стоуэрса, Канзас-Сити, США
Вклад
Программное обеспечение, Формальный анализ, Методология
Конкурирующие интересы
Конкурирующие интересы не заявлены
Алехандро Санчес Альварадо
Институт медицинских исследований Стоуэрса, Канзас-Сити, США
Медицинский институт Говарда Хьюза, Институт медицинских исследований Стоуэрса, Канзас-Сити, США
Пожертвование
Концептуализация, Надзор, Получение финансирования, Администрирование проекта, Написание — обзор и редактирование
Внесли равный вклад с
Николас Ронер
Для корреспонденции
[email protected] org
Конкурирующие интересы
Конкурирующие интересы не заявлены «Этот ORCID iD идентифицирует автора этой статьи:» 0000-0002-1966-6959
Николас Ронер
Институт медицинских исследований Стоуэрса, Канзас-Сити, США
Кафедра молекулярной и интегративной физиологии, Медицинский центр KU, Канзас-Сити, США
Вклад
Концептуализация, Надзор, Получение финансирования, Администрирование проекта, Написание — обзор и редактирование
Внесли равный вклад с
Алехандро Санчес Альварадо
Конкурирующие интересы
Конкурирующие интересы не заявлены «Этот ORCID iD идентифицирует автора этой статьи:» 0000-0003-3248-2772
Финансирование
Медицинский институт Говарда Хьюза
Алехандро Санчес Альварадо
Национальный научный фонд (1
2)
Николя Ронер
Национальные институты здравоохранения (GM127872)
Николя Ронер
Институт медицинских исследований Стоуэрса
Эндрю Си Бокс
Кристофер Вуд
Алехандро Санчес Альварадо
Николя Ронер
Deutsche Forschungsgemeinschaft (PE 2807/1-1)
Роберт Пеус
Американская ассоциация анатомов (постдокторская стипендия)
Элис Аккорси
Национальные институты здравоохранения (DP2AG071466)
Николя Ронер
Общество биологии развития (грант Emerging Research Organisms)
Элис Аккорси
Фонд Эдварда Маллинкродта
Николя Ронер
Спонсоры не участвовали в разработке исследования, сборе и интерпретации данных или принятии решения о представлении работы для публикации.
Благодарности
Мы признательны Хуа Ли за ее помощь в статистическом анализе, а также благодарим Службу лабораторных животных и Центр водных видов спорта в Институте медицинских исследований Стоуэрса за животноводство. Мы хотели бы поблагодарить Blair Benham-Pyle, Carolyn Brewster, Viraj Doddihal, Julia Peloggia de Castro и Barbara Milutinovic за их критические комментарии к более ранней версии этой рукописи. Эта работа была поддержана институциональным финансированием ACB, CW, ASA и NR. ASA является исследователем Медицинского института Говарда Хьюза. NR также поддерживается Фондом Эдварда Маллинкродта, грантом NIH R01 GM127872, DP2AG071466 и премией NSF EDGE 19.23372. AA была поддержана грантом Emerging Models от Общества биологии развития (SDB) и постдокторской стипендией Американской ассоциации анатомов (AAA). RP был поддержан грантом Deutsche Forschungsgemeinschaft (PE 2807/1-1).
Этика
Эксперименты на животных: исследования и уход за животными были одобрены Институциональным комитетом по уходу и использованию животных (IACUC) Института медицинских исследований Стоуэрса. протокол (№2018-0187 и №2019-080).
Старший редактор
Didier YR Stainier, Институт исследований сердца и легких им. Макса Планка, Германия
Редактор-рецензент
Роберт П. Цинцен, Центр молекулярной медицины им. Макса Дельбрюка, Германия
Рецензент
Joshua WK Ho, Кардиологический научно-исследовательский институт Виктора Чанга, Австралия
История публикаций
Препринт опубликован: 9 апреля 2019 г.(смотреть препринт)
Получено: 2 декабря 2020 г.
Принято: 20 июля 2021 г.
Принятая рукопись опубликована: 21 июля 2021 г. (версия 1)
Версия записи опубликована: 17 августа 2021 г. (версия 2)
Авторское право
© 2021, Accorsi et al.
Эта статья распространяется в соответствии с лицензией Creative Commons Attribution License, которая разрешает неограниченное использование и распространение при условии указания оригинального автора и источника.
Метрики
Число цитирований статей, полученное путем опроса самых высоких значений из следующих источников: PubMed Central, Crossref, Scopus.
Ссылки для скачивания
Список ссылок, состоящий из двух частей, для загрузки статьи или частей статьи в различных форматах.
Открытые цитаты (ссылки для открытия цитат из этой статьи в различных онлайн-сервисах управления ссылками)
Менделей
ЧитатьКуб»>
Процитируйте эту статью (ссылки для загрузки цитат из этой статьи в форматах, совместимых с различными инструментами управления ссылками)
Алиса Аккорси
Эндрю Си Бокс
Роберт Пеус
Кристофер Вуд
Алехандро Санчес Альварадо
Николя Ронер
(2021)
Image3C, мультимодальный интегративный метод, основанный на изображениях и независимый от меток, для анализа отдельных клеток
eLife 10 :e65372.
https://doi.org/10.7554/eLife.65372
Скачать БибТекс
Скачать .RIS
Категории и теги
Инструменты и ресурсы
Биология развития
Pomacea канальцевая
одна ячейка
кластеризация клеток на основе морфологии
Исследовательский организм
Рыбка данио
Неспособность к обучению и расстройства — HelpGuide.org
Неспособность к обучению
Трудно ли вашему ребенку учиться в школе? Боятся ли они читать вслух, писать эссе или заниматься математикой? Вот как распознать признаки различных типов расстройств обучения.
Что такое нарушения обучаемости?
Неспособность к обучению или расстройства обучения — это общие термины, обозначающие широкий спектр проблем с обучением. Неспособность к обучению не является проблемой интеллекта или мотивации, а дети с ограниченными способностями к обучению не ленивы и не глупы. На самом деле, большинство из них так же умны, как и все остальные. Их мозг просто устроен по-разному, и эта разница влияет на то, как они получают и обрабатывают информацию.
Проще говоря, дети и взрослые с ограниченными возможностями обучения видят, слышат и понимают по-разному. Это может привести к проблемам с изучением новой информации и навыков и их применением. Наиболее распространенные типы нарушений обучаемости включают проблемы с чтением, письмом, математикой, рассуждениями, аудированием и речью.
Хотя у каждого ребенка время от времени возникают проблемы с домашним заданием, если в какой-то области обучения постоянно возникают проблемы, это может указывать на расстройство обучения.
Дети с ограниченными возможностями обучения могут добиться успеха и добиваются успеха
Может быть трудно признать, что у вашего ребенка есть расстройство обучения. Ни один родитель не хочет видеть, как страдает его ребенок. Вы можете задаться вопросом, что это может означать для будущего вашего ребенка, или беспокоиться о том, как он справится со школой. Возможно, вы обеспокоены тем, что, привлекая внимание к проблемам с обучением вашего ребенка, его могут пометить как «медленного» или отправить в менее сложный класс.
Но важно помнить, что большинство детей с ограниченными возможностями обучения такие же умные, как и все остальные. Их просто нужно учить способами, адаптированными к их уникальным стилям обучения. Узнавая больше о нарушениях обучаемости в целом и о трудностях обучения вашего ребенка в частности, вы можете помочь проложить путь к успеху в школе и за ее пределами.
Если вы беспокоитесь, не ждите
Если вы подозреваете, что трудности в обучении вашего ребенка могут потребовать специальной помощи, пожалуйста, не откладывайте поиск поддержки. Чем раньше вы двинетесь вперед, тем больше у вашего ребенка шансов полностью раскрыть свой потенциал.
Неспособность к обучению выглядит очень по-разному у разных детей. У одного ребенка могут быть проблемы с чтением и правописанием, а другой любит книги, но не понимает математику. Еще один ребенок может испытывать трудности с пониманием того, что другие говорят или говорят вслух. Проблемы очень разные, но все они связаны с расстройствами обучения.
Выявить трудности с обучением не всегда просто. Из-за большого разнообразия нет единого симптома или профиля, на который можно было бы обратить внимание в качестве доказательства проблемы. Однако некоторые предупреждающие знаки встречаются чаще, чем другие, в разном возрасте. Если вы знаете, что это такое, вы сможете вовремя распознать расстройство обучения и быстро принять меры, чтобы помочь вашему ребенку.
Следующие контрольные списки предлагают некоторые распространенные тревожные флажки для расстройств обучения. Помните, что дети, у которых нет проблем с обучаемостью, все равно могут испытывать некоторые из этих трудностей в разное время. Время для беспокойства наступает, когда наблюдается постоянная неравномерность в способности вашего ребенка овладеть определенными навыками.
Признаки и симптомы нарушения обучаемости: Дошкольный возраст
Проблемы с произношением слов.
Проблема с поиском подходящего слова.
Трудно рифмовать.
Проблемы с изучением алфавита, чисел, цветов, форм или дней недели.
Трудности в следовании указаниям или обучению.
Трудно управлять мелками, карандашами и ножницами или раскрашивать линии.
Проблемы с пуговицами, молниями, застежками или обучением завязыванию шнурков.
Признаки и симптомы нарушения обучаемости: 5–9 лет
Проблемы с изучением связи между буквами и звуками.
Невозможно смешивать звуки в слова.
Путает основные слова при чтении.
Медленно осваивает новые навыки.
Постоянно пишет слова с ошибками и делает частые ошибки.
Проблемы с изучением основных математических понятий.
Трудно определить время и запомнить последовательности.
Признаки и симптомы неспособности к обучению: Возраст 10-13 лет
Трудности с пониманием прочитанного или математическими навыками.
Проблемы с открытыми тестовыми вопросами и текстовыми задачами.
Не любит читать и писать; избегает чтения вслух.
Плохой почерк.
Плохие организаторские способности (спальня, домашняя работа и стол в беспорядке и беспорядке).
Проблемы с обсуждением в классе и выражением мыслей вслух.
Одно и то же слово пишется по-разному в одном документе.
Проблемы с чтением, письмом и арифметикой
Неспособность к обучению часто группируется по набору навыков школьной области. Если ваш ребенок учится в школе, наиболее заметные типы расстройств обучения обычно связаны с чтением, письмом или математикой.
Неспособность к обучению при чтении (дислексия)
Существует два типа неспособности к обучению при чтении. Основные проблемы с чтением возникают, когда трудно понять взаимосвязь между звуками, буквами и словами. Проблемы с пониманием прочитанного возникают, когда невозможно понять значение слов, фраз и абзацев.
Признаки затруднений при чтении включают проблемы с:
Распознаванием букв и слов.
Понимание слов и идей.
Скорость и беглость чтения.
Общие словарный запас.
Нарушения обучаемости по математике (дискалькулия)
Нарушения обучаемости по математике сильно различаются в зависимости от других сильных и слабых сторон ребенка. Способность ребенка заниматься математикой будет по-разному зависеть от неспособности к обучению языку, нарушения зрения или трудностей с последовательностью действий, памятью или организацией.
Ребенок с нарушением обучаемости по математике может испытывать трудности с запоминанием и организацией чисел, знаками операций и числовыми «фактами» (например, 5+5=10 или 5×5=25). У детей с нарушениями обучаемости математике также могут быть проблемы с принципами счета (например, счет двойками или счет пятерками) или трудности с определением времени.
Неспособность к обучению письму (дисграфия)
Неспособность к обучению письму может включать физический акт письма или умственную деятельность по восприятию информации. Базовое расстройство письма относится к физическим трудностям в формировании слов и букв. Неспособность к экспрессивному письму указывает на трудности с организацией мыслей на бумаге.
Симптомы неспособности к обучению письменной речи связаны с процессом письма. К ним относятся проблемы с:
Аккуратность и последовательность письма.
Точное копирование букв и слов.
Согласованность правописания.
Организация и связность письма.
Другие типы нарушений обучаемости и расстройств
Чтение, письмо и математика — не единственные навыки, на которые влияют расстройства обучаемости. Другие типы нарушений обучаемости включают трудности с моторикой (движение и координация), пониманием разговорной речи, различением звуков и интерпретацией визуальной информации.
Неспособность к обучению в области двигательных навыков (диспраксия)
Двигательные трудности относятся к проблемам с движением и координацией, будь то мелкая моторика (резание, письмо) или крупная моторика (бег, прыжки). Двигательную инвалидность иногда называют «выходной» активностью, что означает, что она связана с выводом информации из мозга. Чтобы бегать, прыгать, писать или что-то резать, мозг должен иметь возможность общаться с необходимыми конечностями для завершения действия.
Признаки того, что у вашего ребенка могут быть проблемы с координацией движений, включают проблемы с физическими способностями, которые требуют зрительно-моторной координации, например, держать карандаш или застегивать рубашку.
Неспособность к обучению языку (афазия/дисфазия)
Неспособность к обучению языку и общению включает способность понимать или воспроизводить разговорную речь. Язык также считается выходной деятельностью, потому что он требует организации мыслей в мозгу и обращения к нужным словам, чтобы вербально объяснить или сообщить что-то.
Признаки расстройства обучения на основе речи включают проблемы с навыками вербальной речи, такими как способность пересказывать историю, беглость речи и способность понимать значение слов, указания и т.п.
Проблемы обработки слуха и зрения: важность ушей и глаз
Глаза и уши являются основными средствами доставки информации в мозг, этот процесс иногда называют «вводом». Если глаза или уши не работают должным образом, обучение может пострадать.
Нарушение обработки слуха . Специалисты могут называть способность хорошо слышать «навыками обработки слуха» или «рецептивной речью». Способность правильно слышать вещи сильно влияет на способность читать, писать и писать по буквам. Неспособность различать тонкие различия в звуке затрудняет произношение слов и понимание основных принципов чтения и письма.
Нарушение зрительной обработки — Проблемы со зрительным восприятием включают отсутствие тонких различий в формах, перестановку букв или цифр, пропуск слов, пропуск строк, неправильное восприятие глубины или расстояния или проблемы с координацией глаз-рука. Профессионалы могут называть работу глаз «визуальной обработкой». Зрительное восприятие может повлиять на двигательные навыки, понимание прочитанного и математику.
Common types of learning disorders
TYPE OF DISORDER CREATES PROBLEMS WITH
Dyslexia – Difficulty with reading Reading, writing, spelling, speaking
Dyscalculia – Трудности с математикой Решение математических задач, понимание времени, использование денег
Дисграфия – Трудности с письмом Handwriting, spelling, organizing ideas
Dyspraxia (Sensory Integration Disorder) – Difficulty with fine motor skills Hand-eye coordination, balance, manual dexterity
Dysphasia/Aphasia – Difficulty with language Понимание разговорной речи, понимание прочитанного
Нарушение слуховой обработки – Трудности восприятия различий между звуками Чтение, понимание, язык
. не всегда происходит из-за неспособности к обучению. Тревога, депрессия, стрессовые события, эмоциональные травмы и другие состояния, влияющие на концентрацию, усложняют процесс обучения. Кроме того, СДВГ и аутизм иногда сосуществуют или их путают с нарушением обучаемости.
СДВГ – Синдром дефицита внимания и гиперактивности (СДВГ), хотя и не считается нарушением обучаемости, безусловно, может мешать обучению. У детей с СДВГ часто возникают проблемы с сидением на месте, концентрацией внимания, выполнением инструкций, организованностью и выполнением домашних заданий.
[Читайте: СДВГ у детей]
Аутизм — Трудности в овладении определенными академическими навыками могут быть связаны с распространенными нарушениями развития, такими как аутизм и синдром Аспергера. У детей с расстройствами аутистического спектра могут быть проблемы с общением, чтением языка тела, обучением базовым навыкам, дружбой и зрительным контактом.
Надежда на проблемы с обучаемостью: мозг может измениться
Наука добилась больших успехов в понимании внутренней работы мозга, и одно важное открытие, которое дает новую надежду на проблемы с обучаемостью и нарушениями, называется нейропластичностью . Нейропластичность относится к естественной пожизненной способности мозга меняться.
На протяжении всей жизни мозг способен формировать новые связи и генерировать новые клетки мозга в ответ на опыт и обучение. Эти знания привели к революционным новым методам лечения неспособности к обучению, которые используют способность мозга меняться. Инновационные программы, такие как программа Эроусмита, используют стратегические упражнения для мозга, чтобы выявить и укрепить слабые когнитивные области. Например, для детей, которым трудно различать разные звуки в слове, существуют новые компьютерные обучающие программы, которые замедляют звуки, чтобы дети могли их понимать, и постепенно увеличивают скорость их понимания.
[Читать: Помощь детям с нарушениями обучаемости]
Эти открытия в области нейропластичности дают надежду всем учащимся с нарушениями обучаемости, и дальнейшие исследования могут привести к новым дополнительным методам лечения, нацеленным на фактические причины неспособности к обучению, а не просто предлагая стратегии преодоления компенсировать недостатки.
Диагностика и тестирование на неспособность к обучению и расстройства
Поскольку диагностика неспособности к обучению не всегда проста, не думайте, что вы знаете, в чем проблема вашего ребенка, даже если симптомы кажутся очевидными. Важно, чтобы ваш ребенок был проверен и оценен квалифицированным специалистом. Тем не менее, вы должны доверять своим инстинктам. Если вы думаете, что что-то не так, прислушайтесь к своей интуиции. Если вы чувствуете, что учитель или врач преуменьшают ваши опасения, обратитесь за вторым мнением. Не позволяйте никому говорить вам «подождите и посмотрите» или «не беспокойтесь об этом», если вы видите, что ваш ребенок испытывает трудности. Независимо от того, вызваны ли проблемы вашего ребенка неспособностью к обучению, необходимо вмешательство. Вы не ошибетесь, изучив проблему и приняв меры.
Имейте в виду, что поиск человека, который может помочь, может занять некоторое время и усилия. Даже эксперты иногда путают нарушения обучаемости с СДВГ и другими поведенческими проблемами. Возможно, вам придется немного осмотреться или попробовать более одного профессионала. А пока постарайтесь набраться терпения и помните, что вы не всегда получите четкие ответы. Старайтесь не слишком увлекаться попытками определить ярлык расстройства вашего ребенка. Оставьте это профессионалам. Вместо этого сосредоточьтесь на шагах, которые вы можете предпринять, чтобы поддержать своего ребенка и устранить его симптомы на практике.
Процесс диагностики и тестирования на нарушение обучаемости
Диагностика нарушения обучаемости — это процесс. Он включает тестирование, сбор анамнеза и наблюдение квалифицированным специалистом. Очень важно найти авторитетного реферала. Начните со школы вашего ребенка, и если они не смогут вам помочь, обратитесь к своему врачу или друзьям и родственникам, которые успешно справились с трудностями в обучении.
К специалистам, которые могут проводить тесты и диагностировать нарушения обучаемости, относятся:
Clinical psychologists
School psychologists
Child psychiatrists
Educational psychologist
Developmental psychologist
Neuropsychologist
Psychometrist
Occupational therapist (tests sensory disorders that can lead to learning problems)
Speech and language therapist
Иногда несколько специалистов координируют свои действия в одной команде, чтобы получить точный диагноз. Они также могут запросить мнение учителей вашего ребенка.
Получение помощи для детей с нарушениями обучаемости
Когда речь идет о нарушениях обучаемости, не всегда легко понять, что делать и где найти помощь. Обращение к специалистам, которые смогут точно определить и диагностировать проблему, безусловно, важно. Вы также захотите сотрудничать со школой, в которой учится ваш ребенок, чтобы обеспечить ему приспособления и получить специализированную академическую помощь. Но не забывайте о своей роли. Вы знаете своего ребенка лучше, чем кто-либо другой, поэтому берите на себя инициативу в изучении вариантов, узнавая о новых методах лечения и услуг и наблюдая за образованием вашего ребенка.
Узнайте подробности о нарушениях обучаемости вашего ребенка. Узнайте о типе нарушения обучаемости вашего ребенка. Узнайте, как инвалидность влияет на процесс обучения и какие когнитивные навыки задействованы. Оценивать методы обучения легче, если вы понимаете, как неспособность к обучению влияет на вашего ребенка.
Исследовательские методы лечения, услуги и новые теории. Помимо информации о типе нарушения способности к обучению у вашего ребенка, узнайте о наиболее эффективных доступных вариантах лечения. Это может помочь вам защитить своего ребенка в школе и продолжить лечение дома.
Лечение и услуги на дому. Даже если у школы нет ресурсов для оптимального лечения расстройства обучаемости у вашего ребенка, вы можете воспользоваться этими вариантами самостоятельно дома, с терапевтом или репетитором.
Развивайте сильные стороны вашего ребенка. Несмотря на то, что дети с ограниченными возможностями обучения испытывают трудности в одной области обучения, они могут преуспеть в другой. Обратите внимание на интересы и увлечения вашего ребенка. Помощь детям с нарушениями обучаемости в развитии их увлечений и сильных сторон, вероятно, также поможет им справиться с трудными областями.
Неспособность к обучению может сильно расстраивать детей. Представьте, что у вас возникли проблемы с навыком, с которым все ваши друзья с легкостью справляются, боясь опозориться перед классом или изо всех сил пытаясь выразить себя. Вещи могут быть вдвойне неприятными для исключительно способных детей с ограниченными возможностями обучения — сценарий, который не является чем-то необычным.
У детей с ограниченными возможностями обучения могут возникнуть проблемы с выражением своих чувств, успокоением и чтением невербальных сигналов от других. Это может привести к трудностям в классе и со сверстниками. Хорошая новость заключается в том, что как родитель вы можете оказать огромное влияние в этих областях. Социальные и эмоциональные навыки являются наиболее постоянными показателями успеха для всех детей, включая детей с нарушениями обучаемости. Они перевешивают все остальное, включая академические навыки, в прогнозировании достижений и счастья на протяжении всей жизни.
[Читать: Воспитание эмоционально интеллектуальных детей]
Неспособность к обучению и сопровождающие ее трудности в учебе могут привести к низкой самооценке, изоляции и проблемам с поведением, но не обязательно. Вы можете противостоять этим вещам, создав надежную систему поддержки для детей с ограниченными возможностями обучения и помогая им научиться выражать себя, справляться с разочарованием и преодолевать трудности. Сосредоточив внимание на развитии вашего ребенка как личности, а не только на академических достижениях, вы поможете ему выработать хорошие эмоциональные привычки, которые закладывают основу для успеха на протяжении всей жизни.
Доступная онлайн-терапия
Получите профессиональную помощь в сети лицензированных терапевтов BetterHelp.
НАЙТИ ТЕРАПЕВТА СЕЙЧАС
HelpGuide поддерживается считывателем. Мы можем получить комиссию, если вы зарегистрируетесь в BetterHelp по предоставленной ссылке. Учить больше.
Поиск поддержки при оказании помощи ребенку с нарушением обучаемости
Все дети могут одновременно радовать и утомлять, но может показаться, что ваш ребенок с нарушением обучаемости особенно утомителен. Вы можете испытать некоторое разочарование, пытаясь работать со своим ребенком, и это может показаться тяжелой битвой, когда у вас нет необходимой информации. После того, как вы узнаете, в чем заключается их конкретная неспособность к обучению и как она влияет на их поведение, вы сможете начать решать проблемы в школе и дома. Если вы можете, обязательно обратитесь к другим родителям, которые решают аналогичные проблемы, поскольку они могут быть отличным источником знаний и эмоциональной поддержки.
Авторы: Джина Кемп, магистр искусств, Мелинда Смит, магистр искусств, и Джин Сигал, доктор философии.
Вехи развития Центра по контролю и профилактике заболеваний (CDC) — проверьте вехи развития вашего ребенка в разном возрасте. (Центры по контролю и профилактике заболеваний)
LD Basics — включает общие предупреждающие знаки и симптомы, способы реагирования и советы по раннему получению помощи. (LD Online)
Типы нарушений обучаемости – Обзор типов нарушений обучаемости и ссылки на более подробные статьи. (Американская ассоциация лиц с ограниченными возможностями обучения)
Основы дислексии. Обзор дислексии, способов ее диагностики и доступных методов лечения. (Международный фонд дислексии)
Понимание дисграфии – узнайте, что вызывает ее и какие учебные мероприятия могут помочь. (Международный фонд дислексии)
Нарушение слуховой обработки – Как обнаружить, диагностировать и помочь ребенку. (KidsHealth)
Нарушения невербальной обучаемости. Обзор этой часто игнорируемой неспособности к обучению. (LD онлайн)
Последнее обновление: 31 августа 2022 г.
Повышение подвижности капель липидов после вирусной иммунной стимуляции . прог. Липид Рез. 2019;75:100989. doi: 10.1016/j.plipres.2019.100989. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
2. Welte M.A. Жир в движении: внутриклеточное движение липидных капель. Биохим. соц. Транс. 2009; 37: 991–996. doi: 10.1042/BST0370991. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]
3. Вальм А.М., Коэн С., Легант В. Р., Мелунис Дж., Хершберг У., Уэйт Э., Коэн А.Р., Дэвидсон М.В., Бетциг Э., Липпинкотт-Шварц Дж. Применение спектрального изображения и анализа на системном уровне к выявить интерактом органеллы. Природа. 2017; 546: 162–167. doi: 10.1038/nature22369. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
4. Norregaard K., Metzler R., Ritter C.M., Berg-Sørensen K., Oddershede L.B. Манипуляции и движение органелл и одиночных молекул в живых клетках. хим. 2017; 117:4342–4375. doi: 10.1021/acs.chemrev.6b00638. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]
5. Эйнштейн А. Über die von der molekularkinetischen Theorie der Wärme geforderte Bewegung von in ruhenden Flüssigkeiten suspendierten Teilchen. Анна. физ. 1905; 322: 549–560. doi: 10.1002/andp.1
20806. [CrossRef] [Google Scholar]
6. Перрин Дж. Движение брауни и молекул. Дж. Чим. физ. Физикохим. биол. 1910; 8: 57–91. doi: 10.1051/jcp/1
0057. [CrossRef] [Google Scholar]
7. Luby-Phelps K., Castle P.E., Taylor D. L., Lanni F. Затрудненная диффузия инертных трассирующих частиц в цитоплазме клеток мыши 3T3. проц. Натл. акад. науч. США. 1987;84:4910–4913. doi: 10.1073/pnas.84.14.4910. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
8. Brangwynne C.P., Koenderink G.H., MacKintosh F.C., Weitz D.A. Цитоплазматическая диффузия: молекулярные моторы смешиваются. Дж. Клеточная биология. 2008; 183: 583–587. doi: 10.1083/jcb.200806149. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
9. Guo M., Ehrlicher A.J., Jensen M.H., Renz M., Moore J.R., Goldman R.D., Lippincott-Schwartz J., Mackintosh F.C., Weitz D.A. Исследование стохастических, двигательных свойств цитоплазмы с помощью микроскопии силового спектра. Клетка. 2014; 158:822–832. doi: 10.1016/j.cell.2014.06.051. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
10. Гао К., Гудман Дж. Липидная капля — хорошо связанная органелла. Фронт. Сотовый Дев. биол. 2015;3:49. doi: 10.3389/fcell.2015.00049. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
11. Herms A., Bosch M., Reddy BJN, Schieber N.L., Fajardo A., Rupérez C., Fernández-Vidal A., Ferguson C. , Рентеро С., Тебар Ф. и др. Активация AMPK способствует диспергированию капель липидов на детирозинированных микротрубочках, что увеличивает митохондриальное окисление жирных кислот. Нац. коммун. 2015;6:7176. doi: 10.1038/ncomms8176. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
12. Chang C.-L., Weigel A.V., Ioannou M.S., Pasolli H.A., Xu C.S., Peale D.R., Shtengel G., Freeman M., Hess H.F., Blackstone C., et al. Spastin привязывает липидные капли к пероксисомам и направляет перенос жирных кислот через ESCRT-III. Дж. Клеточная биология. 2019;218:2583–2599. doi: 10.1083/jcb.201
1. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
13. Kong J., Ji Y., Jeon Y.G., Han J.S., Han K.H., Lee J.H., Lee G., Jang H., Choe S.S., Баес М. и др. Пространственно-временной контакт между пероксисомами и липидными каплями регулирует индуцированный голоданием липолиз посредством PEX5. Нац. коммун. 2020;11:578. doi: 10.1038/s41467-019-14176-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
14. Wilfling F., Wang H., Haas J.T., Krahmer N., Gould T.J., Uchida A., Cheng J.-X., Graham M. ., Кристиано Р., Фрёлих Ф. и др. Ферменты синтеза триацилглицерола опосредуют рост липидных капель, перемещаясь из ER в липидные капли. Дев. Клетка. 2013; 24: 384–399. doi: 10.1016/j.devcel.2013.01.013. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
15. Xu D., Li Y., Wu L., Li Y., Zhao D., Yu J., Huang T., Ferguson C. , Партон Р.Г., Ян Х. и др. Rab18 способствует росту липидных капель (LD), связывая ER с LD посредством взаимодействий SNARE и NRZ. Дж. Клеточная биология. 2018;217:975–995. doi: 10.1083/jcb.201704184. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
16. Kilwein MD, Welte MA. Подвижность капель липидов и контакты органелл. Контакт. 2019; 2 doi: 10.1177/2515256419895688. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
17. Jarc E., Petan T. Капли липидов и управление клеточным стрессом. Йель Дж. Биол. Мед. 2019; 92: 435–452. [PMC free article] [PubMed] [Google Scholar]
18. Cocchiaro J.L., Kumar Y., Fischer E.R., Hackstadt T., Valdivia R.H. Цитоплазматические липидные капли перемещаются в просвет паразитофорной вакуоли Chlamydia trachomatis. проц. Натл. акад. науч. США. 2008;105:9379–9384. doi: 10.1073/pnas.0712241105. [Статья PMC бесплатно] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
19. Boulant S., Douglas M.W., Moody L., Budkowska A., Targett-Adams P., McLauchlan J. Основной белок вируса гепатита C индуцирует липид Перераспределение капель в зависимости от микротрубочек и динеина. Движение. 2008; 9: 1268–1282. doi: 10.1111/j.1600-0854.2008.00767.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
20. Cheung W., Gill M., Esposito A., Kaminski C.F., Courousse N., Chwetzoff S., Trugnan G., Keshavan N., Lever A., Desselberger U. Ротавирусы связываются с компонентами клеточных липидных капель для репликации в вироплазмах, а соединения, разрушающие или блокирующие липидные капли, ингибируют образование вироплазмы и репликацию вируса. Дж. Вирол. 2010; 84: 6782–6798. doi: 10.1128/ОВИ.01757-09. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Накопление внутриклеточных капель липидов происходит сразу после вирусной инфекции и необходимо для эффективного ответа интерферона. bioRxiv. 2020 г.: 10.1101/2020.02.12.946749. [CrossRef] [Google Scholar]
22. Монсон Э.А., Тренерри А.М., Лоус Дж.Л., Маккензи Дж.М., Хелбиг К.Дж. Липидные капли и липидные медиаторы при вирусной инфекции и иммунитете. ФЭМС микробиол. Ред. 2021 г. дои: 10.1093/фемсрэ/фуаа066. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
23. Бош М., Санчес-Альварес М., Фахардо А., Капетанович Р., Штайнер Б., Дутра Ф., Морейра Л., Лопес Дж.А., Кампо Р., Мари М. и др. Капли липидов млекопитающих являются врожденными иммунными центрами, интегрирующими клеточный метаболизм и защиту хозяина. Наука. 2020; 370 doi: 10.1126/science.aay8085. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
24. Монсон Э.А., Кросс К.М., Дас М., Хелбиг К. Дж. Плотность липидных капель изменяет ранний врожденный иммунный ответ на вирусную инфекцию. ПЛОС ОДИН. 2018;13:e01
. doi: 10.1371/journal.pone.01
. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
25. Кросс К.М., Монсон Э.А., Дамбрепатил А.Б., Смит М., Ценг Ю.-Ю., Ван дер Хук К.Х., Ревилл П.А., Сакер С. , Tscharke D.C., Marsh E.N.G., et al. Виперин связывает STING и усиливает ответ интерферона типа I после обнаружения двухцепочечной ДНК. Иммунол. Клеточная биол. 2020 г.: 10.1111/imcb.12420. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
26. Saitoh T., Satoh T., Yamamoto N., Uematsu S., Takeuchi O., Kawai T., Akira S. Противовирусный белок Viperin продвигает Toll-подобный рецептор 7 — и Toll-подобный рецептор 9опосредованная продукция интерферона типа I в плазмацитоидных дендритных клетках. Иммунитет. 2011; 34: 352–363. doi: 10.1016/j.immuni.2011.03.010. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
27. Lindqvist R., Mundt F., Gilthorpe J.D., Wölfel S., Gekara N. O., Kröger A., Överby A.K. Быстрый ответ интерферона типа I защищает астроциты от флавивирусной инфекции и вызванных вирусом цитопатических эффектов. J. Нейровоспаление. 2016;13:277. doi: 10.1186/s12974-016-0748-7. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
28. Лоу Д.Г. Отличительные особенности изображения из характерных точек, не зависящих от масштаба. Междунар. Дж. Вычисл. Вис. 2004; 60: 91–110. doi: 10.1023/B:VISI.0000029664.99615.94. [CrossRef] [Google Scholar]
29. Тиневез Дж.-Ю., Перри Н., Шинделин Дж., Хупс Г.М., Рейнольдс Г.Д., Лаплантин Э., Беднарек С.Ю., Шорте С.Л., Элисейри К.В. TrackMate: открытая и расширяемая платформа для отслеживания отдельных частиц. Методы. 2017;115:80–90. doi: 10.1016/j.ymeth.2016.09.016. [PubMed] [CrossRef] [Академия Google]
30. Огава К., Хишики Т., Симидзу Ю., Фунами К., Сугияма К., Миянари Ю., Симотоно К. Вирус гепатита С использует липидную каплю для производства инфекционного вируса. проц. Япония. акад. сер. Б физ. биол. науч. 2009; 85: 217–228. doi: 10.2183/pjab.85.217. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
31. Zhang J., Lan Y., Li M.Y., Lamers M.M., Fusade-Boyer M., Klemm E., Thiele C., Ashour J. , Sanyal S. Флавивирусы используют белок липидных капель AUP1 для запуска липофагии и стимулирования производства вирусов. Клеточный микроб-хозяин. 2018;23:819–831.e5. doi: 10.1016/j.chom.2018.05.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
32. Лауфман О., Перрино Дж., Андино Р. Генерируемые вирусом межорганелльные контакты перенаправляют поток липидов для репликации генома. Клетка. 2019;178:275–289.e16. doi: 10.1016/j.cell.2019.05.030. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
33. Chattopadhyay S., Sen G.C. dsRNA-активация передачи сигналов TLR3 и RLR: эффекты, зависящие от индукции генов, и независимые эффекты. J. Интерферон Цитокин Res. 2014; 34:427–436. дои: 10.1089/джир.2014.0034. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
34. Schneider W.M., Chevillotte MD, Rice C.M. Гены, стимулируемые интерфероном: сложная сеть защитных механизмов хозяина. Анну. Преподобный Иммунол. 2014; 32: 513–545. doi: 10.1146/annurev-иммунол-032713-120231. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
35. Nakajima S., Gotoh M., Fukasawa K., Murakami-Murofushi K., Kunugi H. Олеиновая кислота является мощным индуктором накопления липидных капель. путем его этерификации до глицерина диацилглицерол-ацилтрансферазой в первичных кортикальных астроцитах. Мозг Res. 2019;1725:146484. doi: 10.1016/j.brainres.2019.146484. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
36. Lin C., Schuster M., Guimaraes S.C., Ashwin P., Schrader M., Metz J., Hacker C., Gurr S.J., Steinberg G. Активная диффузия и транспорт на основе микротрубочек противостоит силам миозина позиционировать органеллы в клетках. Нац. коммун. 2016;7:11814. doi: 10.1038/ncomms11814. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
37. Binns D., Januszewski T. , Chen Y., Hill J., Markin V.S., Zhao Y., Gilpin C., Chapman K.D., Anderson RGW, Goodman JM Тесное сотрудничество между пероксисомами и липидными телами. Дж. Клеточная биология. 2006;173:719–731. doi: 10.1083/jcb.200511125. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
38. Велте М.А., Гулд А.П. Функции липидных капель не ограничиваются накоплением энергии. Биохим. Биофиз. Акта Мол. Клеточная биол. Липиды. 2017; 1862: 1260–1272. doi: 10.1016/j.bbalip.2017.07.006. [PMC free article] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
39. Pfisterer S.G., Gateva G., Horvath P., Pirhonen J., Salo V.T., Karhinen L., Varjosalo M., Ryhänen S.J., Lappalainen P. ., Иконен Э. Роль формин-подобной 1-зависимой сборки актомиозина в динамике липидных капель и хранении липидов. Нац. коммун. 2017;8:14858. doi: 10.1038/ncomms14858. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
40. Guimaraes S.C., Schuster M., Bielska E., Dagdas G., Kilaru S., Meadows B.R.A., Schrader M. , Steinberg G. Пероксисомы, липидные капли и эндоплазматический ретикулум «автостопом» на подвижных ранних эндосомах. Дж. Клеточная биология. 2015; 211:945–954. doi: 10.1083/jcb.201505086. [Статья PMC бесплатно] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
41. Guo Y., Walther T.C., Rao M., Stuurman N., Goshima G., Terayama K., Wong J.S., Vale R.D., Walter P. ., Фарезе Р.В. Функциональный геномный скрининг выявляет гены, участвующие в формировании и использовании липидных капель. Природа. 2008; 453: 657–661. дои: 10.1038/nature06928. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
42. Hervé J.C., Bourmeyster N. Rab GTPases, главные контролеры торговли эукариотами. Малые ГТФазы. 2018; 9:1–4. doi: 10.1080/21541248.2018.1428853. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
43. Liu P., Bartz R., Zehmer J.K., Ying Y.-S., Zhu M., Serrero G., Anderson R.G.W. Rab-регулируемое взаимодействие ранних эндосом с липидными каплями. Биохим. Биофиз. Акта. 2007; 1773: 784–793. doi: 10.1016/j.bbamcr.2007.02.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
44. Судзуки М., Шинохара Ю., Осаки Ю., Фудзимото Т. Капли липидов: размер имеет значение. Дж. Электрон. микроск. 2011; 60 (Приложение 1): S101–S116. doi: 10.1093/jmicro/dfr016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
45. Zhang S., Wang Y., Cui L., Deng Y., Xu S., Yu J., Cichello S., Serrero G., Ying Y., Лю П. Морфологически и функционально различные субпопуляции липидных капель. науч. Отчет 2016; 6: 29539. doi: 10.1038/srep29539. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
46. Cao Z., Hao Y., Fung C.W., Lee Y.Y., Wang P., Li X., Xie K., Lam W.J., Qiu Y., Tang B.Z., et al. Пищевые жирные кислоты способствуют разнообразию липидных капель за счет обогащения сейпином субдомена ER. Нац. коммун. 2019;10:2902. doi: 10.1038/s41467-019-10835-4. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar]
Viperin взаимодействует с киназой IRAK1 и убиквитинлигазой E3 TRAF6, связывая передачу сигналов врожденного иммунитета с синтезом противовирусных рибонуклеотидов.
Добавить комментарий Отменить ответ
Ваш адрес email не будет опубликован.
Комментарий
Имя
Email
Сайт

Найти:
Рубрики
Букет
Букеты
Гербарий
Коллекции гербариев
Красивые букеты
Необычные цветы
Оригинальные поделки
Поделки
Разное
Рисунки
Рисунки для начинающих
Своими руками
Советы и лайфхаки
Советы новичкам
Цветы

2019 © Все права защищены. Карта сайта

Идеи для ЛД рисунки для срисовки, легкие и красивые по клеточкам

Легкие картинки для ЛД

Красивые картинки

Черно-белые картинки

Крутые картинки

Аниме

Рисунки по клеточкам

Животные

Цветы

Современные идеи для девочек

Видео о рисовании в ЛД

рисунки по клеточкам, картинки для срисовки, новые рецепты любимых блюд, вдохновляющие цитаты, стихи, новые мечты и цели, список книг к прочтению

Как создать личный дневник самому: идеи 2021-2022

Оформление личного дневника

Формирование оригинальных страниц

Оригами на обложке личного дневника

Как оформить первую страницу личного дневника?

Цитаты и все то, что вдохновляет

Необычные темы для личного дневника, любимые рецепты, цитаты, мечты

Цитаты великих людей

Интересные идеи картинок для зарисовок в личный дневник

Любимые блюда

Идеи картинок по клеточкам для дневника

Цели и мечты

Список книг к прочтению, и фильмов для подростков

Из чего сделать ЛД

Видео: Оформление личного дневника

Распечатки для лд цветные веселой какашки.

Картинки, рисунки, распечатки для личного дневника

О чем писать в личном дневнике?

Идеи для иллюстрирования своих записей

Только для вас! Вариант срисовывания по клеткам

Иллюстрации на разную тему

Черно-белые изображения

Личный дневник для девочки плюс шкатулка (видео)

Как сделать личный дневник своими руками: несколько идей

Офисная бумага

Переделка блокнота

Оригами для украшения личного дневника

Делаем веер

Делаем водопад

Поделки для личного дневника

Как сделать конвертик для личного дневника?

Дизайн страничек и милые распечатки для дневника

Идеи личного дневника для девочки (видео)

Идеи для оформления личного дневника

Что нарисовать­

Как украсить личный дневник

Видео

твой личный дневник. Что такое ЛД в вк (Личный дневник)

Картинки, рисунки, распечатки для личного дневника

О чем писать в личном дневнике?

Как оформить лд

Идеи для оформления личного дневника

Что нарисовать­

Как украсить личный дневник

Видео

Кому и для чего нужен дневник?

Электронный дневник

Идеи для оформления личного дневника

Заключение

Идеи для иллюстрирования своих записей

Только для вас! Вариант срисовывания по клеткам

Иллюстрации на разную тему

Черно-белые изображения

Оформление странички в личном дневнике. Классные идеи для ЛД: украшаем личный дневник вместе

Для чего нужен личный дневник

Что пишут в ЛД

Дневник из тетради

Дневник из блокнота

Дневник из альбома

Дневник-папка

Дневник из офисной бумаги

Старая книга – оригинальная основа для ЛД

Дневник с кожаной обложкой

Дневник в интернете

Изготовление обложки

Оригами для обложки

Оформление первой страницы

Календарь в дневнике

Что нарисовать

Что нарисовать